miR1443p在间充质干细胞增值 分化 凋亡过程的调控作用研究.docx

本研究由 本研究由 国家自然科学基金 National natural science foundation of P．R China (3 1472075) 湖北省重大科技创新计划(2014ABA025) The Major Technology Innovation Program of Hubei Province(2014ABA025) 共同资助 万方数据 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是否必威体育官网网址 乙 如需必威体育官网网址，勰密时间 年 月 目 独创性声明 本人声明所星交的论文是我个人在导师指导下进行的研究T作及取得的研究成 果。尽鼗秀}强。除了文中特别加域标注和致谢的地方外。论文巾不包含其他人己经发 表或撰写过的研究成果，也不包鸯为获得华中农她大学或其他教育机掏的学位或证书 而使用过的材耩，援导教师对此进行了审定。与我一同工作的同恚对本研究所馓的任 何贡稼均已在论文巾傲了明鞠的说碉，并表示7谢意。 研究生签名：亥移 时间：弘，l，年|；月，≥嗣 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农韭大学关于保存、使月l学位论文的瓣定，即学生翳须按照学 校要求提交学位论文的印翮本和电子版本学校有权保存提交论文的印翩舨和电子版。 并提供目录检索和阅览服务．可j；【采用髟印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。本人圊意华中农亟大学萄以用苓同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全 都或部分内容。为存在惶际合作关系的兄弟蔫校用户提供文献传递和交换驻务，同时 本人保留在其他媒体发表论文的权力。 注：像密学位论文《即涉及技本秘密，商韭秘密或审请专稠等潜盎瓣要提交爨密的论 文)在解密后瘴用于本授权书。‘ 学位论文作者签名：铘导师签名：抄 签名日期：≯，多年占月，易曩 签名丑期：≯口，易年6月，易目 万方数据 miR一144—3p在间充质干细胞增值、分化、凋亡过程中的调控作用研究 miR一144—3p在间充质干细胞增值、分化、凋亡过程中的调控作用研究 目 录 摘 要 。 i ABSTRACT iv 中英文缩写对照表 “iii 第一章文献综述 ．1 1引言 ．1 2间充质干细胞概述 ．1 3 miRNAs的生物合成过程以及功能 2 4 miRNAs调控间充质干细胞增殖、分化、凋亡 4 4．1 miRNAs调控问充质干细胞成骨分化 ．4 4．1．1 miRNAs抑制问充质干细胞成骨分化 ．．4 4．1．2 miRNAs促进间充质干细胞成骨分化 一6 4．2 miRNAs调控间充质干细胞成脂分化 ．8 4．2．1促进成脂分化的miRNAs ．9 4．2．2抑制成脂分化的miRNAs 1 1 4．3 miRNAs同时调控问充质干细胞成脂和成骨分化 13 4．4 miRNAs同时调控问充质干细胞增殖和成骨分化 17 4．5 miRNAs同时调控间充质干细胞增殖和成脂分化 19 4．6 miRNAs同时调控间充质干细胞增殖、分化以及凋亡 2l 5 miR-144—3p功能概述以及研究的目的与意义 23 第二章材料与方法 25 l试验材料 25 1．1载体和菌株 ．25 1．2主要试剂和仪器 ．25 1．3主要溶液的配制 一26 2试验方法 28 2．1细胞培养及诱导分化 ．28 2．1．1细胞的复苏 一28 万方数据 华中农业大学2016届博士研究生学位(毕业)论文2．1．2细胞的常规培养 华中农业大学2016届博士研究生学位(毕业)论文 2．1．2细胞的常规培养 ．．28 2．1．3细胞冻存 ．．28 2．1．4 C3HIOTl／2细胞诱导成骨分化 28 2．1．5 C3H10T1／2细胞成脂诱导分化 29 2．2细胞转染及双荧光素酶活性的测定 29 2．2．1细胞的转染 一29 2．2．2双荧光素酶相对活性的检测 ．．30 2．3细胞总RNA的提取 ．．30 2．4 qRT-PCR分析 3 l 2．4．1 miRNA的定量分析 ．3 l 2．4．2基因的定量分析 一33 2．5油红O染色 35 2．6碱性磷酸酶染色以及活性测定 35 2．6．1细胞碱性磷酸酶染色 一35 2．6．2碱性磷酸酶活性测定 一35 2．7茜素红染色及定量分析 37 2．7．1茜素红染色 ．．37 2．7．2茜素红定量分析 一37 2．8细胞增殖测定相关研究方法 37 2．8．1流式细胞仪分析细胞周期 一37 2．8．2 xCELLigence细胞实时定量监控系统 38 2．9流式细胞仪分析细胞凋亡情况 39 2．10靶基因预测以及靶基因3UTR双荧光素酶报告载体及其突变载体的构建．．40 2．10．1靶基因预测 40 2．10．2预测靶基因3UTR双