miR4093p抑乳腺癌细胞增殖及侵袭的作用及机制研究.docx

CoNTENTSChinese CoNTENTS Chinese abstract ．． ． ． · · ··l En91ish abstract ·．6 Nomenclature ·11 ChaDter 1 The research about microRNAs aJld breaSt caJlcer 13 chapter 2 E行ects“miR一409．3p on biological charact颉stics of human breast caIlcer cells ， ． ． ··29 Materials aIld Methods ·29 Resuns ． ··41 Discussion ·43 Conclusion -．46 Attached figures ．47 References 54 ChaDter 3 Idemification of miR一409—3p target genes and their roles in breast cancer celIs ． ． ． ．． ．．57 Materials aJld Methods ．．57 Results． ．． ． ．． ． ．． 64 Discussion ． ． ． ． ． ．． 66 Conclusion ．．69 觚ached figures ·70 References ． ． ． ．．． ．．． ．75 English p印erI ·，， En91ish p印erⅡ 93 Published papeT ·99 Acknowledgement ．．100 万方数据 山东大学博士学位论文miR-409-3p抑制乳腺癌细胞增殖及侵袭的作用及机制研究 山东大学博士学位论文 miR-409-3p抑制乳腺癌细胞增殖及侵袭的作用及机制研究 博士研究生：张国强 专 业：普通外科学 博士生导师： 杨其峰教授 中文摘要 研究背景 乳腺癌已成为严重危害妇女健康的恶性肿瘤，全球每年新增接近130万乳 腺癌患者，大约有40万人因乳腺癌死亡。在中国，我们面临的形势同样非常严 峻，乳腺癌患者每年的死亡数量和新发数量分别占全世界的9．6％和12．2％，乳 腺癌目前已成为中国女性发病率最高的恶性肿瘤，在癌症死亡原因中位居第六。 近年来围绕乳腺癌发病机理的研究已取得了一定的成绩，且针对部分乳腺 癌相关的靶点也已研制出相应的靶向治疗药物，并用于临床治疗，但是疗效尚 不能令人满意，需要进一步深入研究乳腺癌的发病机制。 MicroRNAs是一类内源性非编码小RNA，长度约19．25个核苷酸序列，它 通过与靶基因mIⅢA的3’端非翻译区结合，参与基因转录后表达调控，进而调 控细胞增殖、凋亡、分化、代谢等生物学作用。miRNA已被证明在心血管疾病、 神经系统疾病以及肿瘤的发生发展中起到重要的作用。miRNA的异常表达在肿 瘤的发生发展中可能扮演关键的角色，可以作为原癌基因或抑癌基因发挥作用。 目前研究发现多个miIⅢAs包括miR．3l，miR一205，miR一335，miR一200‰ily， miR一124，miR一340和miR—196s具有肿瘤抑制基因的功能，已经证明在乳腺癌中 表达下调。然而，miR一10b，miR一373，miR一520c，miR-9和miR一221／222在乳腺癌 发生和发展中起到原癌基因作用。miR．409．3p位于染色体14q32．3 l，与肿瘤的 形成及进展有关。研究发现miR一409．3D可以促进胃癌细胞的增殖、凋亡，抑制 肿瘤的侵袭和转移，同样还发现miR．409．3p在膀胱癌、肺癌及结肠癌中起到肿 瘤抑制因子的作用，但是它在乳腺癌中扮演的角色仍然不清楚。 研究目的 万方数据 山东大学博士学位论文研究miR一409—3p在乳腺癌细胞和组织中的表达特性，探讨miR一409—3p对 山东大学博士学位论文 研究miR一409—3p在乳腺癌细胞和组织中的表达特性，探讨miR一409—3p对 乳腺癌细胞生物学特性的影响及其在乳腺癌中所发挥的生物学作用机制，为深 入了解乳腺癌发病的分子机制和寻找新的分子治疗靶点奠定理论基础。 研究方法 1．组织样本收集与细胞培养 收集30例新鲜的乳腺癌组织及其癌旁正常组织，液氮中速冻。乳腺癌细胞 系MDA—MB一23 1，MCF一7，MDA—MB．468，T47D及人正常乳腺上皮细胞系HBL． 100均培养在含有10％胎牛血清的DMEM培养基中，置于5％C02、37℃及湿 度饱和的环境中培养。 2．慢病毒生产和转导 扩增miR-409．3p序列，并克隆到HU6．MCS．PGK．EGFP慢病毒载体，感染 293T细胞，获得稳定表达miR一409—3p的病毒颗粒，并进一步转染乳腺癌细胞 系MDA—