G蛋偶联受体激酶5在胚胎造血过程中作用的分析及其相互作用蛋白的筛选.docx

复 复 旦 大 学 硕 士 学 位 论 文 G 蛋 白 偶 联 受 体 激 酶 5 在 胚 胎 造 血 过 程 中 作 用 的 研 究 及 其 相 互 作 用 蛋 白 的 筛 选 相 互 作 用 。在 H E K2 93 T 细 胞 中 通 过 免 疫 共 沉 淀 实 验 发 现 G R K S 与 G 戌L 气2 存 在 相 互 作 用 。接 下 来 通 过 体 外 结 合 实 验 ，我 们 将 纯 化 的 G S T 或 G S T-G A I’A2 蛋 白 与 F lag 一H A 一G R K S 和 G s T 偶 联 的 琼 脂 糖 树 脂 一 起 孵 育 ，得 到 的 免 疫 复 合 物 用 S D S 一队 G E 进 行 分 离 ， 再 用 W 匕Stem Bl ot 方 法 进 行 检 测 ， 发 现 G R K S 和 G A T A Z 存 在 直 接 的 相 互 作 用 。 3 、 从 野 生 型 及 G R K S 基 因 敲 除 的 成 年 小 鼠眼 眶 静 脉 丛 采 血 后 检 测 外 周 血 常 规 ， 发 现 与 野 生 型 小 鼠相 比 ， G R K S 基 因 敲 除 的 成 年 小 鼠外 周 血 中 白细 胞 显 著 减 少 且 主 要 为 粒 细 胞 的 减 少 ， 红 细 胞 和 血 小 板 数 目二 者 之 间 无 差 异 。 4 、 通 过 分 别 在 人 脐 静 脉 内 皮 细 胞 (H U V E C ) 和 人 乳 腺 癌 细 胞 (M D A 一M B 一23 1) 中过 表 达 G R K S ，运 用 免 疫 沉 淀 /质 谱 的 方 法 检 测 了 与 G R K S 有 相 互 作 用 的 蛋 白， 分 析 后 结 合 免 疫 沉 淀 实 验 也 对 其 进 行 了验 证 ， 我 们 发 现 ， 这 些 蛋 白可 大 致 分 为 三 类 : 与 R N A 剪 切 相 关 的 蛋 白 ; 与 D N A 损 伤 修 复 相 关 的 蛋 白 ; 细 胞 骨 架 相 关 蛋 白 。 这 些 都 提 示 G R K S 可 能 通 过 这 些 与 其 相 互 作 用 的 蛋 白发 挥 多 种 多 样 的 目前 还 未 知 的 功 能 。 5 、 综 上 所 述 ，本 研 究 发 现 了 G R K S 在 小 鼠胚 胎 造 血 中 的 调 节 作 用 及 其 对 成 年 小 鼠血 液 系 统 的 影 响 ， 并 新 发 现 了 一 些 与 G R K S 存 在 相 互 作 用 的 蛋 白 。 其 中 ， G R K S 基 因敲 除 后 会 导 致 小 鼠胚 胎 血 岛发 育 受 损 ， 且 成 年 小 鼠外 周 血 中 白 细 胞 的 数 目显 著 减 少 ， 而 外 周 血 中 白细 胞 的 降 低 主 要 是 粒 细 胞 绝 对 数 的 减 少 。 通 过 免 疫 沉 淀 /质 谱 实 验 ，我 们 发 现 与 G R K S 存 在 相 互 作 用 的 蛋 白中 ，一 部 分 参 与 R N A 的 剪 切 ; 一 部 分 与 D N A 损 伤 修 复 相 关 ; 还 有 一 部 分 属 于 细 胞 骨 架 相 关 蛋 白 ，这 些 都 提 示 G R K S 可 能 通 过 这 些 与 其 相 互 作 用 的 蛋 白发 挥 多 种 多 样 的 目前 还 未 知 的 功 能 ， 对 于 研 究 G R K S 的 新 功 能 有 一 定 的 提 示 作 用 。 关 键 词 : G 蛋 白偶 联 受 体 激 酶 5 ; 胚 胎 发 育 ; 胚 胎 造 血 复旦 大 复旦 大 学 硕 士 学 位 论 文 G 蛋 白偶 联 受 体激 酶 5 在 胚 胎 造血 过 程 中作 用 的研 究 及其 相 互作 用 蛋 白的筛 选 A b str a c t G P ro tein 一eo u P led reeeP tor (G P C R ) 15 th e greatest falllily o f m em b ran e re eePto rs.It P la y s a k e y ro le in tra n sd u e in g b ro a d e x tra e e llu la r s ig n a ls in e lu d in g h o r m o n e s， e h e m o k in e s，n e u ro tra n sm it te rs a n d o th e r e n v iro n m e n