MMP9TIMP1在高糖环境HK2中的表达和意义及大酸对其影响.docx

中文摘要摘 中文摘要 摘 要 背景与目的 糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是引起终末期肾病(end stage renal disease，ESRD)的重要病因之一。在DN进展为ESRD的 过程中，肾小管间质纤维化是其重要病理基础。而细胞外基质蛋白 (extracellular matrix protein，ECM)过度堆积是。肾问质纤维化的核心。 肾间质ECM主要由肌成纤维细胞(Myofibroblast，MyoF)分泌。在 病理条件下，肾小管上皮细胞可发生上皮细胞—肌成纤维细胞转分化 (epithelial．myofibroblast transdifferentiation，EMT)是肾间质MyoF 的重要来源。EMT过程主要包括四个步骤：1)小管上皮细胞失去上 皮粘附特性；2)小管上皮细胞表达0c．SMA、重排肌动蛋白；3)裂 解小管基底膜；4)增强细胞移动性和侵袭性。笔者所在实验组中， 已有动物实验和细胞实验表明在DN进程中，肾间质ECM堆积增多， 并且证实肾小管上皮细胞存在EMT，在DN的EMT中如何裂解小管 基底膜? 在肾间质中，Ⅳ型胶是维持肾小管基底膜完整性的主要成分，其 降解酶为金属蛋白酶一9(matrix metalloproteinase一9，MMP-9)。MMP一9 是基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)的重要一员， 后者是主要的ECM降解酶系，与其抑制物TIMPs(tissue inhibitor of metallopro．teinases，TIMPs)以1：1的分子比例存在于正常机体中，共 同调节ECM，二者的比值在肾间质病变的研究中比分别观察二者更 硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 有意义，更能综合反映系统降解ECM的能。MMP．9的特异性抑制物 为TIMP．1(tissue inhibitor of metalloproteinase．1，TIMP一1)。近年 来研究发现多种肾脏疾病中均观察到MMP．9水平的增高和活性增 强， MMP一9／TIMP．1比例失调。高糖环境下，人近段肾小管上皮细 胞(human proximal tubular epithelial cells，HK-2)中是否存在EMT? HK．2细胞中MMP．9与TIMP．1的表达水平及二者之间的比值如何变 化? 在DN的治疗中，大黄是使用普遍的一味中药。大黄酸(Rhein) 是大黄的主要有效成分。I临床与实验研究结果均表明大黄酸具有肯定 的肾脏保护作用。大黄酸对于肾脏的保护是否涉及到对于MMP．9、 TIMP一1表达水平及其比值的影响? 本研究拟于体外进行细胞培养，观察在HK．2细胞中反映上皮细 胞表型特征的E钙黏蛋白(E—Cadherin)、反映MyoF表型特征的旺 平滑肌肌动蛋白(仅一SMA)、MMP．9、TIMP．1的表达及MMP．9／TIMP一1 比值的变化，并用大黄酸干预处理，观察大黄酸对上述指标的影响， 探讨在DN病变中MMP．9、TIMP．1表达变化的意义，探讨大黄酸延 缓肾间质病变的机制。 方法 应用细胞培养技术，按下列实验条件分组培养HK．2细胞，分为 以下六组：空白对照，即低糖(5．5mmol／L)DMEM培养基；高渗对 照组，高渗(甘露醇24．5mmol／L+5．5mmol／L葡萄糖DMEM培养液) II 硕士学位论文培养基；高糖(30mmol／L)DMEM培养基； 硕士学位论文 培养基；高糖(30mmol／L)DMEM培养基； 高糖+大黄酸25ttg／ml； 高糖+大黄酸50I．tg／ml；高糖+大黄酸1001-Lg／ml。于48h收集各组细胞 提取总蛋白，免疫印迹方法(Western Blotting，WB)检测a-SMA、 E．Cadherin的表达；分别于Oh、24h、48h、72h收集各组细胞提取总 蛋白，Western Blotting检测MMP．9、TIMP．1的蛋白表达，并观察 MMP．9／TIMP．1比值变化。 仕 里 当日 木 高糖环境下HK一2细胞与低糖培养组比较，E．Cadherin表达下 降(PO．05)，旺．SMA表达增高(PO．05)，MMP．9的表达增高 (尸O．05)，TIMP．1的表达增高(P0．05)，MMP．9／TIMP．1比值 下降(尸o．05)。经大黄酸处理后的各高糖环境培养组与无干预高 糖培养组比较，E—Cadherin表达增高(尸O．05)，0【．SMA表达下降 (尸O．05)，MMP．9表达下降(尸0．05)，TIMP．1表达下降(P O．05)，MMP．9／TIMP．1比值增高(尸o．05)，且MMP．9、TIMP一1 的下调及其比值的上调随药物浓度与时间推移而更