hNUC促进巨核细胞系的增殖和分化-遗传学专业毕业论文.docx

作用。hNUDC在人类的许多组织都有表达，但在造血祖细胞的表达量比在其他组织高， 作用。hNUDC在人类的许多组织都有表达，但在造血祖细胞的表达量比在其他组织高， 并且在促进造血细胞生长方面具有重要作用。但是，hNUDC在造血组织的表达和调控机 制还不清楚。 本论文首次采用小鼠骨髓来源的巨核细胞作为研究对象，体外观察llNuDc对于小 鼠骨髓细胞巨核的增殖和分化。结果显示，在半固体培养基中hNUDC可明显促进小鼠 骨髓中巨核细胞集落生成单位(Colony forming unit ofmegakaryocyte，CFU—MK)的生 成；在液体培养基中hNUDC可明显促进小鼠骨髓中巨核细胞成熟。流式细胞仪测定和 免疫荧光染色，进一步确证了hNUDC可显著增加小鼠巨核细胞CD4t+和CD61+细胞的百 分含量和细胞核的多倍体化，且hNUDC刺激产生的巨核细胞核多倍体的含量明显高于 TPO。hNUDC刺激产生的前血小板数量是TPO的1．5倍，而TPO对成熟的巨核细胞产 生前血小板形成没有明显的作用。 除了观察hNUDC对于小鼠骨髓细胞的增殖和分化以外，本论文还研究了hNUDC 对于人脐血和外周血来源的CD34+细胞的增殖和分化作用。结果显示，在无血清甲基纤 维素半固体中，hNUDC能够促进CD34+细胞分化增殖形成CFU．MK集落。hNUDC还可 显著增加巨核细胞表面标志物CD41+的表达，并且刺激产生高倍性的巨核细胞显著地多 于TPO。hNUDC对人前血小板形成的作用与对小鼠巨核细胞的作用相同。 为了进一步确定hNUDC对巨核细胞发育的功能及其机制，使用间接免疫荧光染色 方法进一步确证了hNUDC在人和小鼠巨核细胞的不同发育阶段和前血小板阶段的表达 情况。结果清楚地显示，hNUDC能够特异地与Mpl受体相结合，并且hNUDC还分布于 巨核细胞和血小板内含颗粒中的微管上。因此，hNUDC不仅具有促进巨核细胞增殖和分 化的作用，而且对于前血小板形成和血小板释放也可能具有极其重要的作用。 总之，本论文的结果明确证明了hNUDC可以激发许多与TPO相同的生物反应。TPO 主要作用于巨核细胞分化的早期阶段，而hNUDC主要作用于巨核细胞分化的晚期阶段。 尽管hNUDC作为TPO-‘基因敲除小鼠的残余血小扳水平的补偿机制，被独立激活的途 径还没有研究清楚，但是目前的研究发现，hNUDC作为Mpl的第二配体，在巨核系的 发育成熟和血小板的生成中的确具有重要的作用。 关键词：人核迁移蛋白；巨核细胞；前血小板；血小板生成素 hNUDC hNUDC Promotes Proliferation and Differentiation of Megakaryocytopoiesis Name： YanYang Supervisor： Prof．Peilin Xu Abstract The production of piatelets from the megakaryocyte lineage known as megakaryocytopoiesis is a complex process and is regulated by many hematopoietic growth factors．Thrombopoietin(TPO)participates in both proliferation and differentiation of the megakaryocyte lineage and is crucial for megakaryocytopoiesis．However,TPO is not absohtely required for the last steps of platelet formation,and high level of TPO in fact prohibits piatelet formation． Myeloproliferative leykemia(Mpl)is a member of the cytokine receptor snperfamily． Only one ligand to Mpl is Memjfied thus far despite the presence of the two tandem domains．Binding of TPO to Mpl results in activation of all intracelhlar cascade reaction that induces the lineage specific differentiation of megakaryocytes．However,the signaling events t