CpGDN对支气哮喘小鼠气道炎症及黏液形成的影响.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 广东医学院 硕士学位论文 CpG-ODN对支气哮喘小鼠气道炎症及黏液形成的影响 姓名：贾明雅 申请学位级别：硕士 专业：@ 指导教师：吴斌 201005 CpG． CpG．ODN对支气管哮喘小鼠气道炎症及黏液形成的影响 中文摘要 【目的】 本实验通过观察CpG—ODN对哮喘小鼠Thl厂rh2细胞因子、气道杯状细胞、 肺组织MUC5AC mRNA及MUC5AC表达水平的影响，探讨CpG．ODN抑制支 气管哮喘小鼠气道炎症以及黏液形成的机制和作用，为其对哮喘的防治提供理论 依据。 【方法】 按随机数字表将30只昆明雌性小鼠随机分为3组，N组为正常对照组、A 组为哮喘模型组、C组为CpG．ODN治疗组，每组10只小鼠。正常对照组：用 生理盐水代替卵清蛋白(OVA)进行小鼠腹腔注射和雾化吸入；哮喘组以OvA 致敏激发小鼠；CpG．ODN治疗组于激发前l小时给予腹腔注射干预。所有小鼠 在最后一次激发24h后被处死采集标本，计数肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总 数和嗜酸性粒细胞(Eos)数目，苏木素一伊红(HE)染色和阿利新蓝．过碘雪夫 染色(AB．PAS)观察小鼠肺组织病理形态学改变，用酶联免疫吸附试验(ELISA) 检测BALF中白介素-4(IL．4)和丫一干扰素(IFN．Y)表达水平，以逆转录．聚合 酶联反应(RT-PCR)法和免疫组织化学法(IH)分别观察小鼠肺组织中MUC5AC mRNA含量及黏蛋白MUC5AC的表达水平。所得数据均用统计学软件SPSSl3．0 进行统计分析。 【结果】 1小鼠气道、肺组织炎症的变化 脏染色显示：正常对照组小鼠支气管管壁及其周围肺组织结构完整，未见 或偶见少量炎性细胞浸润，无明显炎性渗出；哮喘组小鼠支气管壁及其周围组织 和肺泡可见以中性粒细胞为主的大量炎性细胞浸润，气道上皮杯状细胞明显增 多，部分支气管上皮细胞损伤脱落，支气管腔内分泌物增多；CpG．ODN治疗组 支气管壁及其周围组织和肺泡炎性细胞浸润明显减轻，上皮结构基本完整。 AB．PAS染色显示：三组小鼠气道均有不同程度的黏蛋白表达，哮喘组小鼠 气道上皮杯状细胞增生明显，管腔内可见大量黏液分泌，AB．PAS染色胞浆呈紫 红色；CpG 红色；CpG．ODN干预组小鼠气道上皮杯状细胞增生减轻，粘液分泌减少，经统 计学分析，差异有统计学意义(尸O．01)。 2小鼠BALF细胞总数及Eos计数的变化 哮喘组小鼠BALF中自细胞总数、Eos计数较正常对照组明显升高(尸 0．01)，CpG．ODN干预组，BALF中白细胞总数、Eos计数与哮喘组比较明显减 少(尸0．01)，差异有统计学意义。 3 BALF中IL．4及IFN吖表达水平的变化 哮喘组BALE炎性细胞因子IL．4水平与正常组相比显著升高(尸O．01)， IFN吖水平较对照组明显下降(PO．01)，CpG．ODN干预组，IL．4水平与哮喘组 相比显著降低(P0．01)，IFN吖水平较对照组明显升高(尸O．01)，差异有统计 学意义。 4小鼠肺组织MUC5AC mI矾A含量及其蛋白表达的变化 正常对照组小鼠支气管肺组织仅少量表达黏蛋白(MUC5AC)mRNA及其 蛋白，而哮喘组表达显著增高，CpG．ODN干预组，表达减少，经统计学分析， 差异有统计学意义(PO．01)。 5小鼠BALF中Eos与IL．4水平的相关性分析 小鼠BALF中Eos与IL-4水平经相关分析，呈正相关(垆30，产0．816，P 0．01)。 6小鼠肺组织中黏蛋白MUC5AC表达与BALF中IL．4水平的相关性分析 小鼠肺组织黏蛋白MUC5AC IOD值与BALF IL．4水平经相关分析，呈正 相关(萨30，，=0．83 1，尸0．01)。 7小鼠肺组织中黏蛋白MUC5AC表达与BALF中Eos计数的相关性分析 小鼠BALF中E0s与肺组织中黏蛋白MUC5AC水平经相关分析，呈正相关 (，产30，，=O．886，P0．01)。 【结论】 l CpG-ODN通过增强小鼠111l反应，可有效的纠正哮喘Tlll／rnl2的失衡。 2 CpG．ODN可抑制哮喘小鼠Eos水平，抑制炎症细胞尤其是Eos的气道浸润。 3 CpG．ODN可抑制哮喘小鼠气道黏液素MUC5AC lll】刚A的表达，降低GCH／M， 达到抑制气道粘液的形成目的。 【关键词】 CpG．ODN；哮喘：黏液蛋白 2 Effect Effect of CpG—ODN on the formation of airⅣay innammation and mucus in asthmatic mice Abstract 【obj ectiVe】 T0 observe thc innuence of CpG-ODN 0n ast