CRISPRCas9技术构建LCANmnat1小鼠动物型及其发病机理研究和PHEX基因新发嵌合突变导致低磷酸盐血症性佝偻病.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含为获得迸望盘鲎或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我～同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作 了明确的说明并表示谢意。 、] 学位论文作者签名： 肾拈 签字日期： 矽‘b年弓月f 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 逝望盘堂 有权保留并向国家有关部门或机构 送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权迸姿蠢堂可以 将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (必威体育官网网址的学位论文在解密后适用本授权书) 学位敝作者虢可。沿 导师签名：赭导师签名：衫磁≤刍 签字日期：≯l切年≥月1 日 签字日期：y I b年；月1 日 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 致谢 致 谢 此时此刻，内心非常激动，两年半在浙大的日子，有太多的回忆，太多的快 乐，太多的感恩。 首先，感谢我的导师祁鸣教授。遇见祁老师，能成为您的学生是我人生最大 的幸运。祁老师在我心目中就是偶像一样的存在，学术上取得辉煌的成就，唱歌 运动样样拿手，最重要的是拥有高尚的品德。感谢祁老师两年半的关怀与帮助， 无论是科研方面还是生活上，从您身上学到了太多，祝愿您永远这么活力健康幸 福j 其次，感谢俞萍老师对我的实验、论文以及生活各方面的关怀与指导。俞老 师您这么多年管理实验室真心不容易，谢谢您的付出，我们大家都一直铭记在心 里，如果没有您的管理，就没有发展成今天的Qi Lab，希望您照顾好自己的身体， 烦恼消消，幸福常伴! 再次，感谢实验室的伙伴们，大师兄丛培宽、张婷师姐、天颖师姐、Joseph、 San、忠位师兄、翁琛，虽然你们已经毕业，依然想念你们，感谢你们曾经的帮助 以及现在的关心。感谢现在陪伴我的师弟师妹们，雪、君慧、阿杰、韩帅、岳俐、 尊敬，因为你们，有太多感动和幸福，回忆满满，让我如此舍不得离开大家。我 想说我们的团队是一个团结向上的集体，相信未来一定会越来越好! 另外，感谢实验室的工作人员，卢师姐、雍晶师姐还有沈师姐，谢谢你们的 帮助。 最后，感谢我的爸爸和妈妈，你们就像我的朋友一样，我的快乐你们愿意分 享，我的烦恼你们愿意分担，永远给我鼓励，为我加油!愿时光慢些走，愿你们 慢点老! 千言万语汇成一句：感谢j 感谢生命中遇见你们!再也不忘! 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 中文摘要 浙江大学医学院医学遗传学 硕士研究生陈姣 导师 祁鸣教授 第一部分 CRISPR-Cas9技术构建LCA-NmnaH小鼠动物模型 及其发病机理研究 背景：遗传性疾病是出生缺陷的重要原因，单纯性眼科遗传病近300种，其中先 天性黑蒙症(Leber’S congenital amaurosis，LCA)是发生最早、最严重的遗传性视 网膜病变。目前已发现18种与LCA相关的致病基因，我们课题组运用外显子组 捕获和新一代高通量测序的方法，发现NMNATl基因突变可以导致第9型先天性 黑蒙症。但是具体的突变致病机制未知。 方法：从生物信息学分析、细胞学分析以及CRISPR-Cas9构建定点突变小鼠动物 模型三方面探究突变可能的致病机理。生物信息学分析包括人和小鼠NMNATl蛋 白同源性分析，确保以小鼠作为动物模型的可信性；蛋白晶体结构分析，找到最 可能影响蛋白结构的位点作为突变研究对象；蛋白质相互作用分析，探索与 NMNATl相互作用的蛋白。细胞学分析方面构建8种突变和一种野生型重组质粒， 进行荧光共聚焦和荧光定量实验，探究突变对亚细胞定位和对RNA水平的影响， 后续将进一步进行蛋白质水平的WesternBlot实验。CRISPR．Cas9构建小鼠动物模 型方面，已获得用于显微注射的gRNA、Cas9 mRNA和模板DNA，已购买和饲养 供体鼠(C57)和受体鼠(ICR)，获得动物模型后将从表型、生化分析、细胞分子 II 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 水平等方面全面探索致病机制，。并且探寻可行的