FGFR3 P53基因在膀胱移行细胞癌肿瘤发生中的作用及临床生学价值的研究.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 天津医科大学博士论文 FGFR3、P53基因改变在膀胱移行细胞癌肿瘤发生中的 作用及其临床生物学行为的研究 研究生：王一 。导师：孙光教授 摘 要 膀胱癌为泌尿系统最常见的肿瘤，在全世界范围内，每年诊断病例达 2600，ooO例，其中3．2％为新发病例。2002年，美国预测54，000例新发病例，12，000 例死亡病例，位居男性肿瘤发病率的第9位，在女性为25位。在我国，男性膀胱 癌占全身肿瘤的第8位，在女性占12位以后。世界范围内临床与病理学因素预测 肿瘤的发生与进展已经广泛展开。 随着分子生物学的发展及其在肿瘤中的应用，现在认为肿瘤发生机制主要 是原癌基因的激活和抑癌基因的失活导致细胞增殖失控及凋亡缺陷。所以，肿 瘤被视为一种基因疾病。纠正肿瘤细胞中异常基因的行为，抑制癌基因的过度 表达，增强抑癌基因的功能，将从分子水平治疗肿瘤。 膀胱肿瘤在人类肿瘤中可能表现为的两种不同肿瘤发生途径。第一条途径 于1993年发现，为肿瘤抑制基因TP53的改变。TP53基因突变共同的生物学作 用为使蛋白的转录活性失活，从而进行细胞周期的调节、诱导凋亡及DNA的修 复。p53定位于17q13．1，全长近20kb，共有11个外显子和10个内含子，转录 产物为2．5 kb的mRNA，编码一个53 KD含有393个氨基酸的蛋白。p53蛋白 对维持细胞正常生长及分化起到核心作用，也是化学致癌物质攻击的主要靶基 因，从而成为肿瘤中发生突变的常见基因。其突变热点存在于第5、6、7、8外 l  天津医科大学博士论文 显子等片段。 第二条路径为最近倍受关注的FGFR3基因的突变。FGFR3基因为跨膜的酪 氨酸蛋白激酶受体家族之一，基因定位于人类染色体4p16．3，长约16．5kb，有 19个外显予和18个内含子组成。FGFR3的cDNA有4．4kb，可译框架有2520 个核苷酸，编码840个氨基酸组成的蛋白。4p16．3的LOH可见于22％的膀胱肿 瘤患者，表明一个肿瘤抑制基因可能存在于这个区域。体细胞FGFR3基因突变 多见于表浅的乳头状膀胱肿瘤，膀胱肿瘤中的FGFR3突变热点存在于第7、10、 15外显子片段。有证据的积累表明FGFR3突变的激活而不是基因扩增在膀胱肿 瘤??发生中发挥作用。迄今为止，膀胱肿瘤中已经发现了8个被证实的点突变。 本研究通过免疫组织化学染色检测FGFR3及p53蛋白在膀胱肿瘤组织中的 表达，初步研究了蛋白水平上FGFR3及p53与膀胱肿瘤发生及预后的关系。目 前国内外对此尚缺乏大量的病例研究。对FGFR3及P53基因突变的检测，我们 采用了目前世界上最为流行与高效的变性高压液相(denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC)对扩增的基因外显子产物进行筛选后，进行DNA 测序，检测FGFR3及P53基因各外显子突变的情况。对进一步探讨FGFR3及 P53基因突变在膀胱肿瘤发生及其临床生物学行为等方面的研究奠定了基础。 第一章膀胱移行细胞癌组织中FGFR3、p53及K卜67蛋白 的表达及其与膀胱癌预后的关系 目的：探讨膀胱移行细胞癌(Bladder transitional cell carcinoma,BTCC)组 织及正常膀胱粘膜组织中成纤维细胞生长因子受体3(fibroblast growth factor receptor3，FGFR3)、p53及l(i-67蛋白表达情况，同时分析FGFR3、p53及I(i．67 的表达与临床病理参数之间的关系及其相互之间的相关性，初步揭示BTCC发 II  天津医科大学博士论文 生、发展的分子机制，为进一步探讨膀胱肿瘤的发生发展奠定了基础。 方法：应用免疫组织化学方法检测不同病理分期及组织分级的BTCC标本 和正常膀胱粘膜中FGFR3、p53及I(i．67蛋白的表达情况；Ki67蛋白结果计算 标记指数值(1abeling index．LI)。另外应用免疫蛋白印迹检测FGFR3在不同组 织中的表达情况。探讨BTCC组织中FGFR3、p53及l(i．67蛋白的表达之间的关 系及三者与各临床病理学参数之间的关系。 结果；免疫组织化学结果显示，FGFR3表达阳性率在膀胱移行细胞癌中为 54．6纵59／108)，而正常膀胱粘膜组织FGFR3无表达，两组间差异有显著性 (p0．05)，且FGFR3的表达率与膀胱癌的分级和分期密切相关(P‘O．01)。p53 在移行细胞癌组及正常膀胱粘膜中的表达率分别为40．7％(44／108)和0(P0．01)， 且随着组织病理学分级的增高，p53蛋白阳性表达率星增高，p53蛋白阳性表达 率在各级间有显著差异(Po．01)；另外，p53蛋白在浸润性BTCC中