FKBP51在小鼠肝脏纤维化中的作用以及分子机制的探究-比较医学专业毕论文.docx

中国医学科学院北京协和医学院硕士学位论文引言 中国医学科学院北京协和医学院硕士学位论文 引言 FKBP5 1是一种具有肽基脯氨酰顺．反异构酶(PPIase)活性的免疫亲和蛋白，它 含有多肽重复序列结构域(TPR)，能够介导蛋白与蛋白之间的相互作用。作为一种 共伴侣蛋白，FKBP51能够直接与伴侣蛋白(热休克蛋白Hsp90／70)结合参与激素一受 体复合物的形成。关于FKBP51的作用，许多研究者已经揭示出其与糖脂类代 谢、神经系统疾病、肿瘤发生及耐药性等方面存在密切的关系，但关于其在肝脏 纤维化发生中的作用，目前并没有此方面的报道。本论文利用FKBP51基因敲除 小鼠做两部分的研究：第一部分为FKBP51在小鼠肝脏纤维化中的作用以及分子 机制的探究：第二部分为FKBP51基因敲除小鼠肝脏与大脑海马区RNA表达谱系 的比较生物信息学分析。这两部分的研究将为人们对于肝脏纤维化了解、以及 FKBP51在代谢和神经调节方面作用机理提供新的认识。 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院硕士学位论文第一部分 中国医学科学院北京协和医学院硕士学位论文 第一部分 FKBP51在小鼠肝脏纤维化中的作用以及分子机制的探究 摘要 【目的】肝纤维化是各种慢性肝病向肝硬化、肝癌发展的必经阶段，是所有慢性肝 病的共同病理基础。虽然肝纤维化发病率高，但目前对其发病机制尚不完全清楚， 且无有效的根本的抗纤维化治疗药物。本论文第一部分通过创建FKBP51基因敲除 小鼠肝脏纤维化模型，研究FKBP5 1在肝脏纤维化中的作用，以期寻找预防和治疗 肝脏纤维化的新的靶点。 【方法】通过创建FKBP5l基因敲除(KO)小鼠肝脏纤维化模型，分析FKBP5l基因 的缺失对肝脏的影响。1)FKBP51基因敲除小鼠的肝脏纤维化模型创建。将实验小 鼠分为四组，分别为注射橄榄油的野生型(WT)小鼠(WT-Con)、注射橄榄油的 FKBP51基因敲除小鼠(KO．Con)、注射四氯化碳的野生型小鼠(WT-CCL4)、注射 四氯化碳的FKBP51基因敲除小鼠(KO。CCL4)，腹腔注射，每周三次，持续两周； 2)肝脏表观病理观察。对肝脏取材后观察四组肝脏的色泽、质地以及表面光滑度； 3)肝脏病理学分析。对四组小鼠肝脏切片，分别进行HE染色，Masson染色，纤 维化程度分析，来研究wT和KO小鼠肝脏组织病理学变化；4)利用Real．time实 验，对与肝脏纤维化相关的分子进行检测；5)免疫组化实验。对纤维化标志分子进 一步进行验证；6)测定细胞凋亡。对四组小鼠的肝脏切片进行细胞凋亡的检测；7) 免疫印迹实验。对四组小鼠肝脏组织中的自噬、代谢、TGF．13通路相关基因进行检 测。 【结果】1)通过免疫组织化学方法鉴定证明成功构建了wT和KO肝脏纤维化动 物模型；2)通过对肝脏表观进行观察发现：CCL4处理组中，wT小鼠肝脏色泽暗 淡，质地硬，表面粗糙，布满小颗粒纤维化结节，而FKBP5lKO小鼠肝脏色泽较淡， 质地较硬，表面较粗糙，布满少量小颗粒纤维化结节，比野生型小鼠纤维化程度轻； 3)肝脏病理学分析发现：CCL4处理组中，WT小鼠肝细胞变性坏死，汇管区可见 大量纤维组织增生且炎症细胞多，而FKBP51KO小鼠炎症细胞少且胶原沉积少；4) 通过Real．time和免疫组化实验发现，Collagen I、TIMPI、CTGF和a．SMA等纤维 化标志蛋白在FKBP5l基因敲除小鼠中的表达明显少于野生型小鼠，且与肝脏纤维 化Marker相关的细胞因子CTGF、IL6、INF-丫、TGF．p、TNF．61,也出现此趋势；5) 通过对WT和KO小鼠肝脏进行凋亡测定实验发现，FKBP5l基因敲除小鼠肝脏凋 亡细胞很少，细胞中几乎无胞核固缩、染色质边聚、胞核染成棕黄色等凋亡现象， 而野生型小鼠肝脏细胞出现大量凋亡细胞：6)免疫印迹实验发现：FKBP5l基因敲 除小鼠白噬较WT相比明显加强，而与纤维化相关的TGF．13中的通路分子在KO 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院硕士学位论文小鼠中明显被抑制。 中国医学科学院北京协和医学院硕士学位论文 小鼠中明显被抑制。 【结论】FKBP51参与TGF．B通路介导的CCL4诱导的肝脏纤维化过程，FKBP51KO 小鼠抵御CCL4诱导的肝脏纤维化。 【关键词】FKBP5 1基因敲除小鼠；肝脏纤维化；TGF．p通路 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院硕士学位论文Abstract 中国医学科学院北京协和医学院硕士学位论文 Abstract [Objectives]Liver fibrosis is the inevitable stage in the development of chronic liver disease to cirrhosis，