FOXO1在TNF-α诱导的Ⅱ型肺泡上细胞凋亡中的作用及其作用机制研究-内科学（呼吸系病）专业毕业论文.docx

硕士学位论文肺泡II型上皮细胞来源的A549细胞由广州军区广州总医院医学实验科细 硕士学位论文 肺泡II型上皮细胞来源的A549细胞由广州军区广州总医院医学实验科细 胞库提供。A549细胞在含10％灭活小牛血清F12K培养基中，置于37℃，5％C02 饱和湿度条件下的培养箱中培养。 3．1增强FOX01表达在TNF．0【诱导的II型肺泡上皮细胞凋亡中的作用及其作 用机制探讨 3．1．1增强FOX01表达对TNF．o【诱导的II型肺泡上皮细胞凋亡的影响 A549细胞分为四组：空白对照组(不加任何干预因素)、TNF一值刺激组(仅 予重组人TNF．0【刺激)、FOX01组(预转染GV230．FOX01质粒并予重组人 TNF．0【刺激)、阴性对照组(预转染GV230空质粒并予重组人TNF一仪刺激)。 采用2％血清浓度培养基饥饿细胞8小时，质粒转染6小时后继续予2％血清浓 度培养基培养10小时，然后予TNF．。【刺激24小时。采用流式细胞仪检测各组 细胞凋亡率。 3．1．2增强FOX01表达对凋亡相关基因bcl2／Bax、Bim表达的影响 实验分组同上。 RT-PCR检测bcl2／Bax、Bim mRNA水平。 Western Blot检测bcl2／Bax、Bim蛋白水平。 3．2 I斟～干扰FOX01表达在TNF—a诱导的II型肺泡上皮细胞凋亡中的作用及 其作用机制探讨 3．2．1 siRNA沉默FOX01对TNF一0c诱导的II型肺泡上皮细胞凋亡的影响 实验分组：将Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞分为四组：空白对照组 (不加任何干预因素)、TNF．a刺激组(仅予重组人TNF—O【刺激)、FOXOlsiRNA 组(预转染FOX01siRNA并予重组人TNF—a刺激)、阴性对照组(预转染阴性 对照siRNA并予重组人TNF．q刺激)。采用2％血清浓度培养基饥饿细胞1 8小 时，siRNA转染6小时后，予TNF一0【刺激24小时。采用流式细胞仪检测各组 细胞细胞凋亡率。 3．2．2 siRNA沉默FOX01对凋亡相关基因bcl2／Bax、Bim表达的影响 实验分组同上。 RT-PCR检测bcl2／Bax、Bim mRNA水平。 Western Blot检测bcl2／Bax、Bim蛋白水平。 III 万方数据 摘 摘 要 3．3统计学方法 采用spss20．0软件进行统计学的分析，计量资料以均数4-标准差(X±S) 表示。各组数据均先进行方差齐性检验，组间均数的比较采用单因素方差分析 (One．WayANOVA)。方差时，多重比较采用LSD检验，方差不齐时，多重比 较采用Dunnett’S T3检验，P0．05差异有统计学意义。 4结果 4．1增强FOX01表达在TNF—Q诱导的II型肺泡上皮细胞凋亡中的作用及其作 用机制探讨 4．1．1增强FOX01表达对TNF—c【诱导的II型肺泡上皮细胞凋亡的影响 TNF．仅组、FOX01组、阴性对照组细胞凋亡率明显高于正常对照组，差异 有统计学意义(P0．05)；TNF．c【组与阴性对照组差异无统计学意义(PO．05)； FOX01组细胞凋亡率明显高于TNF—a组及阴性对照组，差异有统计学意义 (P0．05)。 4．1．2增强FOX01表达对bcl2／Bax、Bim mRNA表达水平的影响 TNF．t／,组、FOX01组、阴性对照组bcl2／Bax mRNA水平明显低于正常对 照组，差异有统计学意义(P0．05)；TNF一仅组与阴性对照组差异无统计学意义 (P0．05)；FOX01组明显低于TNF．a组及阴性对照组，差异有统计学意义 (P0．05)。 TNF．a组、FOX01组、阴性对照组Bim mRNA水平明显高于正常对照组， 差异有统计学意义(P0．05)；TNF一0【组与阴性对照组差异无统计学意义 (PO．05)；FOX01组明显高于TNF．a组及阴性对照组，差异有统计学意义 fP0．05)。 4．1．3增强FOX01表达对bcl2／Bax、Bim蛋白表达水平的影响 TNF．1／,组、FOX01组、阴性对照组bcl2／Bax蛋白水平明显低于正常对照组， 差异有统计学意义(P0．05)；TNF．仪组与阴性对照组差异无统计学意义 (P0．05)；FOX01组明显低于TNF．a组及阴性对照组，差异有统计学意义 俾0．05)。 TNF—a组、FOX01组、阴性对照组Bim水平蛋白明显高于正常对照组， 差异有统计学意义(P0．05)；n吓．q组与阴性对照组差异无统计学意义 IV 万方数据 硕士学位论文(P0．05)；FOX01组明显高于TNF．伍组及阴性对照组，差异有统计学意义 硕士学位论文 (P0．05)；FOX01组明显高于TNF．伍组及阴性对照组，差异有统计学