JAK2SAT1信号通路在病毒性心肌炎中的作用研究.docx

固温州医学院硕士学位论文 JAK2／STATl信号通路在病毒性心肌炎中的作用研究 研究生：吴婷婷 指导教师： 陈其(主任) 吴蓉洲(主任) 张园海(主任) 中文摘要 目的：探讨细胞信号转导通路酪氨酸激酶JAK2(janus kinase)／信号转导子和转 录激活子1(signal transducer and activator oftranscription 1，STATl)在小 鼠病毒性心肌炎(viral myocarditis，VMC)中的作用，并探讨其在血红素 加氧酶-l(heme oxygenase．1，HO-1)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)间的调控作用。 方法：本实验取110只清洁级4周龄雄性Balb／c小鼠随机分为5组：正常对照组 (N组)10只，心肌炎组(C组)、JAK2抑制剂组(A组)、HO．1激动 剂组(H组)和HO．1抑制剂组(z组)各25只。第0天N组小鼠腹腔 注射不含病毒的无菌病毒维持液，C组、H组、Z组及A组各小鼠腹腔注 射含50皿10。9‘51 TCID50／ml柯萨奇病毒B3(coxsackievirus B3，CVB3)的 病毒维持液，从第1天起做如下处理：A组每天腹腔注射AG490 lOmg／Kg， H组每天腹腔注射Hemin 40IlmoL／Kg，Z组每天腹腔注射Zn PPIX 40lamoL／Kg，N组和C组每天腹腔注射等量无菌PBS，于实验第lO天各 组随机取10只小鼠处死并留取心脏标本。采用Reed．Muench法计算 TCID50以测定病毒毒力；HE染色后光镜观察小鼠心肌组织病理改变，并 参照Rezkalla法计算心肌炎症积分；Real．time PCR检测小鼠心肌组织 HO．1 mRNA、STATl mRNA及iNOS mRNA表达，并采用2-aaCt法计算 各组基因相对表达量；免疫组织化学法检测小鼠心肌磷酸化STATl蛋白 表达，并应用Image—pro plus 6．0图像分析软件测定阳性表达部位的MOD 以测定心肌P．STATl蛋白相对表达水平。结果：1．小鼠一般情况及生存 率比较：C组、H组、z组及A组小鼠于接种病毒后第3天起逐渐萎顿， 体重进行性下降，毛发粗糙、无光泽，N组小鼠活动能力强，毛发均匀有 光泽，体重逐日增长；H组于接种后第4天开始出现小鼠死亡，C组、A 3  穆温州医学院硕士学位论文 组及Z组于第5天开始出现小鼠死亡，Log．rank检测感染CVB3的各组小 鼠间生存率无显著性差异(尸0．05)；2．JAK2／STATl信号通路与病毒性 心肌炎的关系：①心肌病理改变：c组和A组多病灶心肌细胞坏死，间质 大量炎症细胞浸润，以淋巴细胞及单核细胞为主，A组较C组心肌细胞坏 死及炎症浸润更显著，N组心肌纤维排列整齐，间质无炎症细胞浸润；C 组与A组小鼠心肌病理炎症积分均显著高于N组，而A组炎症积分 (3．20-a：0．41)较C组(2．12-4-0．39)进一步升高；②心肌STATl mRNA相 对表达量：以N组为参照组，C组心肌STATl mRNA相对表达量较N组 明显升高，A组心肌STATl mRNA相对表达量与N组比较无显著性差异， 但较C组明显下降；③心肌p-STATl蛋白表达：正常小鼠心肌细胞仅胞 浆内出现极少量p-STATl阳性表达，C组小鼠心肌细胞p-STATl阳性表 达增加，MOD较N组升高，A组心肌细胞p-STATl表达微弱，与N组比 较无显著性差异，但较C组明显下降；④小鼠心肌p-STATl免疫组化MOD 与心肌病理炎症积分之间存在负相关；3．病毒性心肌炎中HO．1、 JAK2／STATl及iNOS的关系：①心肌病理改变：N组心肌细胞结构正常， 间质无炎症细胞浸润，C组、H组、Z组均可见多病灶心肌细胞坏死崩解， 心肌间质内有大量以淋巴细胞及单核细胞为主的炎症细胞浸润，心肌病理 炎症积分较N组均明显升高，Z组心肌细胞坏死及炎症浸润较重，病理炎 症积分(3．2+0．42)较C组(2．2a：0．46)明显升高，而H组心肌炎症改变 相对较轻，病理炎症积分(1．54-0．52)低于C组；②心肌HO-1 mRNA相 对表达量：以N组为参照组，C组、H组及Z组心肌HO-l mRNA相对表 达量均较N组明显升高，其中H组表达量较c组进一步升高，而z组表 达量则较C组有所降低；③心肌STATl mRNA相对表达量：以N组为参 照组，C组、H组及z组心肌STATl mRNA相对表达量较N组均明显升 高，H组心肌STATl mRNA表达量较C组有所降低，而Z组表达量则较 C组有所升高；④心肌iNOS mRNA相对表达量：以N组为参照组，C组、 H组及Z组心肌iNOS相对表达量均较N组明