红霉素及其衍生物治疗类风湿关节炎的可行性研究-内科学专业论文.docxVIP

中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意． 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任． 论文作者签名： 置盗 日期： )—盯。工“ 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学．本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师 为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学．学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和_碡}盘，允许论文被查阅和借阅。学 校可以公布学位论文的全部或部分内容(必威体育官网网址内容除外)，以采用影印、缩 印或其他手段保存论文． 论文作者签名： 漫魄 指导教师签名： 红霉素及其衍生物治疗类风湿 红霉素及其衍生物治疗类风湿 关节炎的可行性研究 前 言 红霉素(erythrornycin，EM)是临床广泛应用的十四元大环内酯类抗生 素，它除具有抗菌活性外，还有多种药理活性，其中包括抗炎活性。临床实 践证明，长期应用小剂量红霉素治疗弥漫性泛细支气管炎(d姐血se panbron- chiolitis，DPB)取得了良好疗效，而且人们确信这种作用不是由于其抗菌活 性而应归因于它的抗炎活性。不仅如此，红霉素还可用于诸如慢性支气管 炎和支气管哮喘等呼吸道疾病的治疗。尽管近年来关于大环内酯类抗生素 抗炎活性报道频繁，但用该类药物治疗除呼吸道炎症之外的其它炎症疾病 却并未引起人们的重视。 类风湿关节炎(rl他t肌atoid an¨tis，RA)是慢性多关节疾病，主要表现 滑膜组织过度增生和炎性细胞浸润。这种滑膜组织的过度增生伴随着关节 软骨和骨的破坏，最终导致患者残疾。取自RA患者的T淋巴细胞和滑液 细胞可分泌核转录因子一KB受体活化子配体(-eceptor activator of NF—KB hgand，RANKL)，RANKL可促使造血祖细胞向破骨细胞分化，引起RA的 骨破坏，T淋巴细胞所分泌的RANKL是引发RA关节损伤的主要原因。因 此可以推测从阻断RANKL的危度去治疗RA将是有意义的。最近的研究 表明，T淋巴细胞除产生RANKL外，还可产生白介素一17(血erleukin，IL— 17)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(鲫ulocyte眦cIophage—colony stirml． 1ating factor，GM—CSF)等细胞因子，这些细胞因子对破骨细胞形成也有非 常强的调节作用，因此，T淋巴细胞在RA的发病机制中所发挥的作用越来 越得到人们的关注。 核转录因子(nuclear丘Ictor kappa B，NF—KB)可调控多种炎性细胞因 子的基因转录。它与NF—KB的抑制蛋白(inllibitory nucle盯factor—kappa B，IKB)结合以无活性的形式存在于细胞浆中，IKB的磷酸化和降解使得 B，IKB)结合以无活性的形式存在于细胞浆中，IKB的磷酸化和降解使得 NF一娼与I翘解离，导致NF—KB的活化，从而促使炎症反应中许多细胞 因子的转录；同时研究表明NF—KB的活化可以阻断细胞的凋亡。RANKL 的活化可引起NF—KB的表达增加。 鉴于T淋巴细胞所分泌的RANKL和NF—KB在炎症反应中的重要作 用，我们开展了一系列的实验研究，以考察红霉素及其无抗菌活性的红毒素 衍生物对T淋巴细胞增殖和RANKL与NF—KB表达的影响。 实验方法 1．用含10％FBS的1640培养液体外培养T淋巴细胞株，分别加入四 种浓度(3．0pg／mL、lO．0pg／mL、30．Op∥Ⅱ正和100．Op∥mL)的红霉素及其 9种衍生物培养24小时，采用MTT法，用酶标仪测定0D鼾。值，计算出各个 化合物对T淋巴细胞增殖的抑制率，进而得出其Ic，。值，评价十个化合物对 T淋巴细胞增殖活性的影响并从中筛选出抑制增殖活性突出的化合物。 2．从论文～中筛选出活性较好的N一去甲基红霉素(I)和十二元环红 霉素衍生物(VIlI)并以红霉素作为阳性对照，进一步进行细胞凋亡和细胞 周期的研究。分别加入上述三种化合物(3．O斗∥mL、IO．O卜∥rllL、30．O弘弓／ mL和100．Ops／mL)培养24小时，然后用流式细胞仪PI染色法观察T淋巴 细胞凋亡和细胞周期