JEVYFV嵌合病毒作为黄热病毒疫苗的抗性和免疫原性研究.docx

JEv．YFV嵌合病毒作为黄热病毒疫苗的抗原性和免疫原性研究原，仓日性声明 JEv．YFV嵌合病毒作为黄热病毒疫苗的抗原性和免疫原性研究 原，仓日性声明 本人声明：所旱交的学位论文是本人在导师的指导_卜．进行的研究工作及取得的研究成果。除本文已 经注明引j{{l的内容外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得内墓直太堂及 其他教育机构的学位或证二f5而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中 作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：受茎主 指导教师签名： 日 期：独!fl孙郾B日 期： 在学期间研究成果使用承诺书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：内蒙占大学有权将!学位论文的全 部内容或部分保留并向国家有关机构、部门送交学位论文的复印件和磁盘，允许编入有关数据库进行检索， 也可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文。为保护学院和导师的知识产权，作者在学期 间取得的研究成果属于内蒙古大学。作者今后使用涉及在学期间主要研究内容或研究成果，须征得内蒙古 大学就读=}{fj间导师的同意；若用于发表论文，版权单位必须署名为内蒙古大!学方可投稿或公开发表。 学位论文作者签名：翌堕王。孚：侮论文作者签名：Ⅵ璎、J 指撒帷名指导教师签名 日 期：独厶璺厶目皇目 日 j步 万方数据 JEV-YFV嵌合病毒作为黄热病毒疫苗 JEV-YFV嵌合病毒作为黄热病毒疫苗 的抗原性和免疫原性研究 摘要 以乙脑疫苗株SAl4—14．2的DNA—based复制子质粒和YF一17D prME基因为 基础，构建新型人工JEV．YFV嵌合病毒，评价该嵌合病毒作为黄热病毒减毒活 疫苗的抗原性和免疫原性。利用DNA．based双质粒系统，把SAl4．14．2的prM．E 基因用YF．17D的prM．E基因进行替换，构建SAl4．14．2和YF一17D疫苗株的嵌 合型cDNA克隆，转染细胞获得JEV．YFV嵌合病毒。采用噬斑法、鉴定实验、 免疫学实验、动物实验等对获得的拯救病毒进行生物学特性研究和疫苗有效性 评价。JEV．YFV嵌合型cDNA转染Vero细胞后，获得拯救病毒，病毒滴度达到 1．39×1 07 PFU／mL，噬斑呈现“针尖”样，与YF．1 7D噬斑大小形态相近，但略小 于SAl4．14—2产生的噬斑。血清学方法鉴定证实为乙脑／黄热病毒嵌合病毒，命 名为rYJ。通过免疫学实验、神经毒性实验、攻毒等实验，发现rYJ和YF．17D 对3～4周龄Balb／c小鼠均无神经外毒性，有相似的神经内毒性。rYJ免疫后小鼠 血清抗体阳转率达到100％，中和抗体滴度达到l：40，与YF．17D基本相同， 用100000 LD50 YFV进行攻毒，rYJ免疫组和YF．17D免疫组均达到100％的保 护效力。rYJ嵌合病毒的成功构建进一步支持了SAl4．14．2成为新型疫苗载体的 可能性，作为YFV减毒疫苗株，其具有良好的的抗原性和免疫原性，但是出于 疫苗安全性考虑，我们可以对病毒的包膜E区进行改造，进一步降低对戒奶小 鼠的神经内毒性，研制比现用疫苗YF．17D毒性更小的新型疫苗。 万方数据 JEv．YFV嵌合病毒作为黄热病毒疫苗的抗原性和免疫原性研究关键词：黄热病毒；DNA．based双质粒系统；嵌合病毒 JEv．YFV嵌合病毒作为黄热病毒疫苗的抗原性和免疫原性研究 关键词：黄热病毒；DNA．based双质粒系统；嵌合病毒 lV 万方数据 内蒙古大学坝上学位论文THE 内蒙古大学坝上学位论文 THE ANTIGENIC ITY AND IMMUNOGENICITY OF JEV．YFV CHIMERIC VIRUS AB STRACT To develop new attenuated live vaccine of the Yellow Fever virus，chimeric virus rYJ based on the backbone vector of Japanese encephalitis virus was constructed and evaluated for the antigenicity and immunogenicity．Based on the two-plasmid system， the prM--E genes of the vaccine strain YF--1 7D were chosen to replace the reciprocal genes of JEV vaccine strain SAl4—14—2．After transfection into the Vero cells，the rescued chimerica vir