Lactobacillus bevis NCL912的耐酸特性及其酸胁迫下差异表达蛋白的研究.docx

 目 录 摘要 。6 Absn佻t ．．8 缩略词表 ．1l 第l章前言 13 1．1酸胁迫及其对乳酸菌生长的影响 13 1．1．1菌自身产酸导致的酸胁迫 13 1．1．2外界环境引起的酸胁迫 。14 1．2提高乳酸菌耐酸能力的方法 ．14 1．2．1筛选和分离新菌株 14 l：2．2生物育种 ．．15 1．2．3添加营养物质 。15 1．2．4实施交叉应激 16 1．2．5酸适应性反应 ．．16 1．3乳酸菌的酸应激反应机制 ．16 1．3．1维持pH的自我平衡(pH homeostasis) 16 1．3．2产生碱性物质 18 1．3．3酸应激反应的分子机制 19 1．3．4改变细胞膜组成 20 1．4蛋白质组学技术 ．20 1．4．1蛋白质组学概述 。2l 1．4．2蛋白质组学研究技术 2l 1．5乳酸菌的蛋白质组学研究 22 1．5．1构建乳酸菌蛋白质组学2．DE图谱 ．23 1．5．2研究乳酸菌的功能及应用 23 1．5．3在适应性反应中的应用 23 1．5．4蛋白质组学在乳酸菌应激反应中的应用 ．．． 24 1．6．研究展望及设想 ．25 本章参考文献 26 第2章厶6朋麻NCL912的耐酸性 32 2．1引言 32 2．2材料 。32 2．2．1菌株 32  目录 2．2．2培养基 32 2．2．3主要仪器和设备 。32 2．2．4主要试剂 33 2．3方法 33 2．3．1厶6馏1，括NCL912的培养 ．33 2．3．2厶6理v西NCL912在不同酸性pH下的生长 。33 2．3．3比生长速率的计算方法 ．33 2．3．4 pH和GABA的测定方法 ．33 2．3．5三．6陀，括NCL912在pH 2．0条件下的存活实验 ．34 2．4结果 34 2．4．1厶6膨1，括NCL912的生长曲线及发酵培养液pH的变化 。34 2．4．2发酵培养基中G惦A的变化 35 2．4．3上．6馏’，括NCL912在pH 2．O条件下的存活情况 ．36 2．5讨论 36 2．6小结 37 本章参考文献 37 第3章L．MSG对上．6旭1，西NCL912耐酸性的影响及其可能的酸应激反应机制 。39 3．1引言 39 3．2材料 39 3．2．1菌株 。39 3．2．2培养基 。39 3．2．3主要仪器和设备 40 3．2．4主要试剂 。40 3．2．5主要试剂的配制 ．40 3．3方法 4l 3．3．1三．6馏1，括NCL912的培养 4l 3．3．2 L．MSG对三．6肼秘NCL912生长的影响 4l 3．3．3比生长速率的计算方法 4l 3．3．4 pH和GABA的测定方法 ．．： 4l 3．3．5在pH 2．0条件下，L．MSG对三．6M妇NCL912存活的影响 4l 3．3．6粗酶提取液的制备 。4l 3．3．7 Q气D酶的活性测定 42 3．3．8统计学分析 42 3．4结果 42 3．4．1 L．MSG对厶6M论NCL912生长和培养基pH变化的影响 ．42 2  目录 3．4．2培养液中GABA的变化 ．．43 3．4．3在pH 2．0条件下，L．MSG对三．6馏1，缸NCL912存活的影响 ．44 3．4．4 L．MSG对GAD酶活的影响 。．45 3．5讨论 45 3．6刀、结 46 本章参考文献 ．．47 第4章L 6彤协NCL912在酸胁迫下的差异蛋白表达 ．．49 4．1引言 ．49 4．2材料 49 4．2．1菌株 49 4．2．2培养基 ．49 4．2．3主要仪器和设备 ．．49 4．2．4主要试剂 50 4．2．5主要溶液的配制 ．50 4．3方法 5 l 4．3．1三．6，譬俯NCL912差异蛋白质组学研究技术路线 ．5l 4．3．2工．6胴街NCL912破壁处理 ．52 4．3．3 L 6M论NCL912全蛋白白勺_提取 。52 4．3．4丙酮沉淀蛋白质 52 4．3．5双向凝胶电泳 52 4．4结果 ．．． 54 4．4．1三．6理1，括NCL912在pH 5．0和4．O条件下的蛋白质浓度 ．54 4．4．2三．6馏v括NCL912在pH 5．O和pH 4．0条件下的差异蛋白谱图分析 55 4．5讨论 56 4．5．1蛋白质破壁方法的确定 。： 56 4．5．2乳酸菌蛋白质组学研究 ．．． 57 4．6 d、结 ．．． 57 本章参考文献 厶 ．57 第5章酸胁迫下L 6形吣NCL912差异表达蛋白的鉴定及分析 ～ 60 5．1引言 ～ ．60 5．2材料 60 5．2．1研究对象 一 ．60 5．2．2主要仪器和设备 ．60 5．2．3主要试剂 ．6l 5．2．4主要试剂的配制 ．．． 6l 3  目录 5．3方法 6 l 5．3．1胶内酶切 ．．6l 5．