LIFStat3信号通路在多阶段胃癌发生中的活状态及其潜在意义分析.docx

学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、使 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、使 用学位论文的规定，同意大连医科大学保留并向国家有关部门或机构 送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权 大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论 文。 论文作者签名： 指导教师签名： 签字日期：趁丝年』月堡日 LIF／Stat3信号通路在多阶段胃癌发生中的活化状态．及其潜在意义分析 LIF／Stat3信号通路在多阶段胃癌发生中的活化状态 ．及其潜在意义分析 硕士研究生：李婷 指导教师：李宏 教授 专业名称：病理学与病理生理学 摘 要 目的检测LIF／Stat3信号通路在胃癌组织和细胞系中的表达与活化特点并探 讨其潜在的肿瘤病理学意义。为达到上述研究目的，采用多种实验技术mRNA和 蛋白质水平系统地分析胃癌中白血病抑制因子(Leukemiainhibitorfactor，LIF)、信号 传导和转录激活因子3(Signal transducer and activator ofthe transeription 3，Stat3)、 血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和存活素 (Survivin)的表达情况，观察LIF的异常表达对于Stat3信号通路的激活作用以 及二者之间的关系，在BGC823细胞系中使用JAK激酶抑制剂AG490阻断该信号 传导通路以了解Stat3信号通路的激活机制，并借此探讨胃癌发生发展过程中可能 存在的潜在分子机制。 材料与方法 胃癌组织标本选自大连医科大学肿瘤研究所建立的胃癌组织 库。胃癌细胞系AGS、HGC27购于美国标准菌库(American Type Culture Collection, ATCC)；MGC803、BGC823从北京肿瘤研究所引进。胃癌组织以癌旁相对正常粘 膜作为对照，基于石蜡组织微阵列技术进行免疫组织化学检测。利用蛋白印迹分 析和RT-PCR的方法平行检测LIF、Stat3、VEGF和Survivin在胃癌细胞系中的表 达情况。而后，检测JAK激酶抑制剂AG490处理前后BGC823细胞系中LIF、 p-Stat3、VEGF和Survivin的表达情况。最后，采用t检验，r检验及Spearman 相关性分析对上述指标的检测结果进行统计学检验，p0．01表明具有显著统计学 差异。 结果 1．与癌旁相对正常胃粘膜比较，胃癌中LIF、VEGF和Survivin的表达及Stat3 核易位的频率均明显提高，二者之间存在明显差异(萨O．000)。 2．在65例胃组织中，45例(45／65，69．23％)表现为Stat3核易位，43例(43／65， 66．15％)表现为LIF染色阳性。此外，在45例核Stat3阳性的组织点中，有40例 (40／45，88．89％)同时表现为LIF染色阳性。对于LIF和Stat3表达阳性率的分析 可发现二者之间存在明显的统计学意义(r=33．762，pO．01)。 3．胃癌组织中VEGF的表达上调和Star3核易位具有明显的统计学正相关(闻．502,pO。01)，对于Survivin的检测也发现了相同的现象(r0．533，tro．01)。 3．胃癌组织中VEGF的表达上调和Star3核易位具有明显的统计学正相关 (闻．502,pO。01)，对于Survivin的检测也发现了相同的现象(r0．533，tro．01)。 4．胃癌细胞系AGS、HGC27、MGC803和BGC823的RT_PCR和蛋白印迹分 析结果显示：AGS中LIF的mRNA水平明显高于其余三个细胞系，而Stat3、VEGF 和Survivin的mRNA表达水平并无明显差异。上述四个指标的蛋白表达在四个细 胞系中也未发现明显的差异。 5．AG490处理胃癌细胞系BGC823前后的免疫组化结果显示：Stat3磷酸化被 抑制，VEGF和Survivin的表达也相应减弱但LIF无明显变化：与此相一致，RT-PCR 分析结果显示：处理后VEGF和Survivin的转录水平明显降低但LIF的变化不明 显。蛋白印迹分析结果显示，VEGF的蛋白表达有较明显降低。 6．在AG490处理后胃癌细胞系BGC823中，P．Stat3磷酸化被抑制并伴有下游 基因VEGF和Survivin的表达下调。这提示，Stat3的活化在胃癌发生过程中的关 键环节之一；该通路可能是胃癌生物治疗的潜在靶点。 结论本实验发现，胃癌组织及细胞系中Stat3的激活及其引起的下游靶基因 VEGF和Survivin表达上调与L