LPLUNC1基因介导NFκB与MAPK信号传通路抑制鼻咽癌的发生发展的机制研究.docx

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LPLUNC1基因介导NFκB与MAPK信号传通路抑制鼻咽癌的发生发展的机制研究

杨一新博士学位论文 杨一新博士学位论文 中文摘要 导是宿主细胞抵御革兰氏阴性细菌的关键。我们应用BrdU掺入实验、 btTT等实验证实了LPS可促进鼻咽癌细胞系lINEl和5-8F细胞的生长 与增殖。通过流式细胞、RT—PCR等研究还发现鼻咽癌细胞可与LPS 相结合且其受LPS调节的机制是由于鼻咽癌细胞中存在LPS受体分子 如CDl4、TLR4与MD2等的表达。同时应用免疫荧光、western—blot、 荧光素酶报告系统等研究发现,鼻咽癌细胞(HNEI、5-8F)可受到 LPS的诱导而活化NF 14 B与MAPK信号传导通路。鼻咽癌细胞在LPS 的诱导下,NF K B p65的表达增加,并且使NF K B p65活化迁移至核 内;同时在LPS的诱导下,鼻咽癌细胞MEKl、ERKl/2和.INKlfl2表达 增加,并且ERKl/2和JNKl/2被激活而进入核内。NF K B与MAPKs的 过度活化是导致细胞增殖与恶性变的重要机制。同时我们研究还发现 LPS增加TNF—a全长启动子活性而对缺失了NFK B结合位点的TNF— Q启动子启动子活性无明显的改变,同时LPS可使鼻咽癌细胞中TNF— a的分泌增加,从而介导炎性因子的释放。因此长期的慢性炎症使 NF K B与MAPK信号传导通路过度活化,可导致鼻咽癌的发生,LPS介 导的信号通路可能是鼻咽癌发生发展的重要分子机制之一。 【LPLuNCl抑制LPS所介导的信号传导通路】 LPLUNCl基因是我室采用联合抑制性消减杂交和cDNA microarray技术分离鼻咽癌差异表达基因的方法克隆的鼻咽组织特 异性表达新基因。我们以往的研究表明,该基因在71%的鼻咽癌患 者中表达下调,而在正常的成人鼻咽组织及人胚鼻咽组织中为高表 ll 杨一新博士学位论文 杨一新博士学位论文 中文摘要 达,这些都提示LPLUNCl可能在鼻咽癌的发生发展中起非常重要的作 用。我们通过构建LPLUNCl的真核表达载体,并将其稳定转染入5—8F、 HNEl鼻咽癌细胞系中,建立5-8F/pEGFP—C2一LPLUNCl与HNEl/ pcDNA3.1(+)-LPLUNCl稳定转染细胞系。结果发现:LPLUNCl可抑制 LPS所诱导的鼻咽癌细胞增殖反应。通过western—blot、免疫荧光等 一系列的实验证实,LPLUNCl可阻断LPS所诱导的鼻咽癌上皮细胞 NF K B p65、ERKl/2和JNKl/2的表达及活化。同时通过瞬时共转染 LPLUNCl与TNF-a荧光素酶报告系统证实LPLUNCl可抑制TNF—a全 长启动予的活性,ELISA结果也证实了LPLUNCl可抑制鼻咽癌细胞受 LPS刺激导致的TNF-Q的产生,抑制炎性因子的释放。因此,LPLUNCl 可能通过阻断LPS介导的NF K B与MAPK信号传导通路而抑制鼻咽癌 的发生发展。 【LPLUNcl通过延缓细胞周期进程而抑制鼻咽癌的发生发展】 细胞周期进程是一个由众多分子参与的严格调控的过程,失去对 细胞周期正常的精细调控是大多数肿瘤发生发展的分子机制之一,因 此,恶性肿瘤往往被称为细胞周期疾病。哺乳动物细胞周期通常由 cyclin—CDK复合物所调控。我们通过对鼻咽癌细胞的细胞生物学研 究进一步证实LPLUNCl可搠制鼻咽癌细胞生长与增殖,并使鼻咽癌细 胞的集落形成减少并降低其裸鼠的成瘤性。经流式细胞分析发现 LPLUNCl可引起5—8F细胞周期分布发生明显改变:G1期细胞明显增 加,s期细胞相应减少,因此,LPLUNCl可延缓鼻咽癌细胞的细胞周 11l 杨一新博士学位论文 杨一新博士学位论文 中文摘要 期G卜S期进程。随后,我们又应用cDNA—microarray研究了LPLUNCt 的表达对鼻咽癌细胞系5-8F细胞基因表达谱的影响,结果筛选出了 369个差异表达基因,其中有175个为下调基因,194个为表达上调 基因,而这些差异表达基因中有19个基因与}^APK(如MAP4K5、MAP3K1 和MAPK9等)及细胞周期(如

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