GMCSF对糖尿病大鼠创面愈合过程中BCL2表水平的影响.docx

大连医科大学 硕士学位论文 GM-CSF对糖尿病大鼠创面愈合过程中BCL－2表达水平的影响 姓名：张贇 申请学位级别：硕士 专业：外科学 指导教师：李正维 201106 GM．CSF对糖尿病大鼠创面愈合过程中BCL．2表达水平的影响 GM．CSF对糖尿病大鼠创面愈合过程中 BCL．2表达水平的影响 硕士生姓名：张赞 指导教师：李正维教授 指导小组：南丰教授 专业名称：外科学 摘要 目的：伤口愈合是一种进化上保守的，复杂的多细胞的过程。这一过程涉及 多种细胞类型，包括角质形成细胞，成纤维细胞，内皮细胞，巨噬细胞和血小板 的协调努力。糖尿病(diabetes)是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其 毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、 胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征。 因为糖尿病引起的周围神经性病变、微血管病变是糖尿病患者创面难以愈合的病 理基础。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM．CSF)是一个多能生长因子，在伤 口愈合的过程中起着重要作用。它能诱导中性粒细胞及单核／巨噬细胞分化、增殖 并活化，；提高创面抗感染能力；促进坏死组织脱落；加强造血前体细胞增殖；趋 化、 激活内皮细胞、成纤维细胞及角质细胞，促进其分化、增殖，使新生血管、肉 芽组织形成及上皮细胞迁移、增殖的时间进一步加快；有利于促愈合因子的分泌、 创面缩小及组织重塑IlJ。这么广泛的作用引起了国内外专家学者的关注，他们将 GM．CSF应用于多种创面，如肿瘤、糖尿病、皮肤病、外科手术术后难愈性创面 和深度烧伤、静脉性溃疡肿瘤的放化疗等多种不愈性创面，加快其愈合。因为在 创面愈合过程中角质形成细胞，成纤维细胞，内皮细胞，巨噬细胞和血小板发挥 着及其重要的作用，而GM．CSF在其间起着催化、激活和活化各种细胞的作用121， 所以我们认为GM．CSF在糖尿病的创面愈合中会起到一定作用。我们通过实验对 糖尿病大鼠模型创面的Bcl．2表达情况来简单探讨一下在糖尿病创面愈合过程中 应用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的作用。 方法：SPF级大鼠60只，体重(290±15)g，雌雄不限。在高脂高糖环境下 喂养4周后准备造模，造模前禁食12小时，不禁水。STZ用新配制的0．1mmol／L 柠檬酸缓冲液PH=4．2稀释。一次性腹腔注射STZ小剂量35mg／kg。血糖稳定时 间约48h．72h。大鼠出现三多症状，体重增加。随即在尾静脉抽血检测．，血糖值大 于l lmmol／L以上。取血糖和体重符合标准的大鼠进行胰岛病理检测证明胰岛细胞 无破坏表明造模成功。随机抽取造模成功后45只大鼠，先将大鼠腹腔麻醉后背部 无破坏表明造模成功。随机抽取造模成功后45只大鼠，先将大鼠腹腔麻醉后背部 剃毛，在背部中线两侧各制作1．5cmx 1．5cm创面，创面剪开皮肤全层，至皮下筋 膜层，无菌敷料加盖，每日换料一次。随机将抽取的45只大鼠分为三组：A组为 糖尿病(DM)创面组15只，B组为糖尿病+GM．CSF创面组15只(方法为将大 鼠麻醉后，腹腔注入GM．CSF)，C组糖尿病+稀释剂创面组15只(方法为将大 鼠麻醉后，腹腔注入稀释剂)。大鼠每5只分笼饲养。肉眼观察各组大鼠术后第3、 5、8、12、18天创面组织愈合情况，将大鼠腹腔麻醉后称重，在尾静脉抽血检测 血糖值，同时记录每只大鼠的体重，空腹血糖。利用透明方格纸方法测得第3、5、 8、12、18天的创面愈合面积，同时计算创面愈合率。沿愈合创面外缘超出约0．5cm 切下创面组织，制片后光镜观查创面各类细胞、血管成活情况。进行免疫组化实 验，观察创面BCL．2和CD34细胞染色的表达情况。 结果：60只大鼠生存57只，死亡3只，死亡原因考虑为在制作创面时麻药过 量。生存大鼠血糖，体重检测，8只补符合II型糖尿病标准，删除其记录数据。剩 余49只，取其中45只纳入研究范围。肉眼观察创面愈合结果：创面形成2天后 各组大鼠伤口均开始结痂。创面形成5天后DM+GM．CSF组较其它3组略有变化， 效果不明显。创面形成7天后从肉眼观察DM+GM．CSF组较其他3组创面愈合情 况较为明显好转。其愈合情况好坏依次为：DM+GM．CSF组，DM+稀释液组，糖 尿病组。创面形成8天时DM+GM．CSF组创面基本愈合，其他2组略有差别。创 面形成18天后DM+GM．CSF组创面全部愈合，其他2组基本愈合，DM组愈合率 较前2组差。免疫组化观察结果是：BCL．2-DM+GM．CSF组较其它两组肉芽组织 明显增厚。肉芽组织由大量的成纤维细胞，胶原纤维和毛细血管组成。在DM--I-稀 释液组的成纤维细胞的胞浆和毛细血管的内皮细胞可见大量的BCL．2阳性表达。 在糖尿病组中偶可见BCL-2的阳性表达。CD34DM+