miR146a单核苷酸多态与肝癌遗传易感性的关联研究及肿瘤相关microRNA微阵列分析的研究.docx

复旦大学博士学位论文 复旦大学博士学位论文 第—部分miR·146a单核苷酸多态与肝癌遗传易感性的关联分析 摘要 肝细胞肝癌(HCC)具有较高的发病率和致死率。我国每年肝癌的发病总 数超过了世界发病总数的。‘半，因而HCC是我国人民的。‘个很大的健康威胁。 HCC的发病风险存在较大的个体差异，一般认为复杂的环境因素和自身的遗传 因素之间的相互作用共同决定了HCC发生的个体差异性。 microRNA(miRNA)是一类广泛参与各种牛命活动的单链RNA，并以在 进化上高度保守的方式参与调节。卜．游靶基冈的表达。越来越多的证据提示 miRNA也参与了HCC的发生。睁核苷酸多态(SNP)是一类在群体中普遍存在的 遗传性多态，研究发现SNP与多种疾病的发生密切相关。鉴于rnjRNA功能的重 要性，位于miRNA的SNP可能会改变miRNA的功能，进而会影响肿瘤的易感 性。 在本研究中，我们较为系统的研究了位于miRNA的12个SNP与中国人群 HCC遗传易感性间的关系。通过对来自江苏启东肝癌高发人群的两轮HCC遗传 易感性关联研究的初筛，我们发现位于miR．146a的rs2910164多态与HCC遗传 易感性显著相关。经过三个独立的中国汉族人群的病例．对照的HCC遗传易感性 关联分析，我们发现miR．146a rs2910164的G型等位基因相比C型，其提高的 肝癌的发病风险具有显著的统计学意义(odds ratio，1．47；95％置信区间： 1．16．1．87；P=0．001·)。此外，我们还发现rs2910164的G型多态携带者的肝癌病 人的发病年龄显著提前，具有较高的血清AFP水平和表现出较差的预后。 应用Real．time定量PCR我们检测了30例肝癌组织中miR．146a的表达水平， 发现miR．146a rs2910164多态的GG型和GC型肿瘤患者的肿瘤组织样品中的 miR．146a的平均表达水平要显著高于CC型患者(尸=0．021)。 进。‘步应用紫外(uV)照射和丝裂霉素C(MMC)等来模拟环境致癌物(如 HBV，黄曲霉素)的促DNA损伤作用，发现过高表达miR．146a的肝癌细胞的生 长速度和存活能力都显著低于对照处理的肿瘤。同时，我们通过高灵敏度检测细 胞DNA断裂损伤的彗星试验发现miR．146a能够促进在损伤刺激下细胞的DNA 断裂。并且miR．146a能够促进DNA双链断裂分子标记H2AX磷酸化的形成。 应用生物信息学上具预测miR．146a的靶基因，我们发现可能的靶基因参与DNA 损伤修复的各个途径rrl，并对预测分析评分较高的两个靶基因(XRCC I和RADl) 做了进一步的实验验证。 此外，通过查阅相关文献和有哪些信誉好的足球投注网站数据库，我们一共获得了33组包含有肿瘤 组织和对照组织的miRNA表达芯片的原始数据：包括1843例肿瘤组织和1097 复旦大学博士学位论文 复旦大学博士学位论文 第—部分miR-146a单核苷酸多态与肝癌遗传易感性的关联分析 例对照组织，分别对应于l 6种常见肿瘤类型。通过对数据的整合分析，我们发 现52种miRNA的表达水平存肿瘤中发生了显著改变，其中包括29个存肿瘤组 织中下调表达的miRNA和23个在肿痫组织中上调表达的miRNA。大部分在多 种肿瘤中差异表达的是已知的与肿瘤相关的miRNA。 我们也发现了一些未见报道的肿瘤相关miRNA。例如，miR-144，miR-132 和miR．154等在多种肿瘤组织中表现为’卜．调性表达，miR-130b，miR-192和 miR一345等在相关肿瘤组织中表现为上调性表达。 我们初步研究了一‘个新的肿瘤棚关miRNA：miR．1 54在肿瘤发生机制巾的 作用。通过Real．time定量PCR，我们在25对肝癌组织中检测了成熟miR．1 54 的表达水平，结果表明miR一154在2l中表现为下调表达，下调表达的组织对约 I叶总数的84％。我们发现在肿瘤细胞中过表达miR．154显著抑制肿瘤细胞的牛 长并将肿瘤细胞阻滞在Gl期。应用生物信息学T具和细胞体外实验我们发现 miR-154能够抑制细胞周期相关蛋白CCND2。 关键词：肝细胞肝癌，miR-146a，rs2910164，DNA损伤修复，遗传易感 性，微阵列芯片，miR-154 中图分类号：Q39 复旦大学博士学位论文 复旦大学博士学位论文 第—部分miR-146a单核苷酸多态与肝癌遗传易感性的关联分析 Abstract Hepatocellular carcinoma(HCC)is the fifth most common malignant cancer and the third most common cause ofcancer mo