MiR26对肝细胞肝癌的转移和血管生成的作用及机制研究.docx

浙江大学博士学位论文 致谢 十年一梦，一梦十年。依稀记得十年前刚进入医学院宣读时的医学誓言，而 今日已然到了博士毕业之际，这漫漫医学路，已经走了有十年。回首这十年，从 初知医理，到渐入医路，从湘雅医学院的求真求切，到浙江大学的求是创新，不 变的是心中那对医学追求的坚定的信念。回首这十年，既是感慨万千，更是感谢 万千。 在浙江大学求医的五年里，我由衷得感谢我的导师，郑树森院士。作为科研 型博士，感谢您给我提供了全国乃至全世界一流的科研平台。国内外的学术会议， 更是让我开阔了医学的眼界。恩师海纳百川和厚德载物的胸怀，将是我终身学--j 的楷模。 感谢指导老师吴健教授对我科研上的指导与帮助。感谢您让我积极参与课题 申请，会议组织和科研教学班的培训。您严谨求学的态度和精湛的医技，必然会 督促我在以后的工作岗位上更加积极进取。 感谢卫生部多器官联合移植研究重点实验室的周琳老师，谢海洋老师，宋朋 红老师，沈克震老师，冯晓文老师，张峰老师，王雁老师，余晓波老师和鱼达老 师。感谢您们在我科研期间，对我的关心与帮助，让我倍加温暖。 感谢我的师兄弟们，感谢丁超峰，叶孙益，吕震，肖衡，彭传会，程绍冰， 张骋，翁小羽，胡文迪，何彬，孙维建，许晓锋，周杰，曹林平，钱泽，蔡贤磊， 罗梦超，感谢你们在我实验生活中对我的帮助和支持。 感谢实验室宋文锋，苏蓉，洪良杰，陈辉，曹国强，陈雷鸣，陈海提供无私 的帮助。 最后我要由衷得感谢我的家人，感谢我的父母这么多年给我的支持，感谢我 的未婚妻对我学习和生活的照顾，感谢身边所有支持我的朋友! 万方数据  浙江大学博士学位论文 中文摘要 MiR-126对肝细胞肝癌的转移和血管生 成的作用及机制研究 浙江大学医学院 外科学(普外) 博士研究生 杜澄利 导 师 郑树森院士 中文摘要 背景 肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上最常见的癌症之一，特 别是在中国。尽管以手术为主的综合治疗的进步，但是HCC的死亡率依然很高。 活跃的转移和血管生成是HCC的两大特征，严重影响肝癌患者的预后。然而，其 机制仍然不甚清楚。 MicroRNAs(miRNA)是一类高度保守,1xRNA。它们通过结合于靶基因的 3’uTR区域来参与调节细胞的各种生物学行为。越来越多的文献报道，miRNAs在 肝癌的发展过程中发挥着重要的作用，包括凋亡，增殖，自噬和EMT等。到目前 为止，在肝癌中同时调节转移和血管生成的miRNAs报道尚少。 MiR-126已经被报道在肿瘤发展过程中有重要的作用。但是其对于肝癌转移和 血管生成的作用仍然不清楚。所以探索miR．126和肝癌转移和血管生成的关系可能 是肝癌治疗研究的一个不错的策略。 目的 II 万方数据  浙江大学博士学位论文 中文摘要 本次研究的目的在于探索miR-126在肝癌组织和细胞中的表达水平，并统计其 与肝癌标本临床病理资料之间的相关性。我们进一步研究了miR．126-弓肝癌转移和 血管生成之间的关系，寻找其发挥作用的靶基因及相关机制。 方法 1． 通过实时荧光定量PcR的办法来研究miR。126在肝癌组织和细胞系中的表达。 2． miR-126 mimics和inhibitors来过表达或抑制其在肝癌细胞中的水平， 3． 运]羽Transwell实验和成血管实验来研究转移和血管生成能力。 4． 利用裸鼠皮下成瘤实验，进行miR-126的体内功能研究。 5． 用生物信息学网站和荧光双报告实验来预测和验gJEmiR-126(拘靶基因。 6． 用免疫组化检测cD34的表达水平，来反应体内血管生成的水平。 结果 1． 在70对肝癌病例中，我们发现肝癌组织中miR．126的表达量明显降低。但是没 有发现miR．126表达量与临床病理资料有相关性。相对于正常肝永生化细胞 L02和Changliver．细胞，7株肝癌细胞系中，有6株NmiR-126的表达降低。 2． 在体外功能研究中，我们发现miR-126过表达之后，可以抑制肝癌细胞的转移 和血管生成的能力，而jmiR-126表达抑制之后，肝癌细胞的转移和血管生成能 力明显上升了。 3． 裸鼠皮下成瘤实验发现，miR．126稳定过表达组的瘤体体积明显小于对照组。 111 万方数据  浙江大学博士学位论文 中文摘要 4． 我们应用生物信息学网站(miRanda，TargetScan)预测出LRP6和PIK3R2是 miR．126的靶基因，并且通过荧光双报告实验和Western blot实验得到了验证。 并且，在70例肝癌病例中LRP6和PIK3R2-9miR．126的表达水平呈负相关的关 系。 5． 在肝癌细胞中分别抑制了LRP6和PIK3R2的表达之后，肝癌细胞的转移能力和 血管生成能力分别下降了。靶基因“