mir3405p靶向Bai3 OCK1 DMD及其对成肌细胞的影响.docx

“973计划项目资助(2014CBl38504)Supported “973计划项目资助(2014CBl38504) Supported by National Key Basic Research Program of China(2014CBl38504) 国家农业技术产业体系自助(CARS-36) Supported bY Chinese Agricaulture Research System(CARS-·36) 万方数据 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是否必威体育官网网址 卺 如需必威体育官网网址，解密时间 年 月 日 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外。论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意． 研触牦霍咄寓 帆如形年多月夕日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生! 已须按照学 校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷崩 和电子版， 并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、 汇编学位 论文．本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学1 ￡论文的全 部或部分内容，为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献传递和交换J 艮务，同时 本人保留在其他媒体发表论文的权力． 注：必威体育官网网址学位论文(印涉及技术秘密，商业秘密或申请专利等潜在臀要提j 芝必威体育官网网址的论 文)在解密后适用于本授权书． 学雠文作者始套哦寓锄始∥荔棚 签名日期：≥口／6年6月／，。日 签名日期：≯彩年／月夕日 注：请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之闻 万方数据 miR-340-5p靶向Bai3、ROCKl、DMD及其对成肌细胞的影响目 miR-340-5p靶向Bai3、ROCKl、DMD及其对成肌细胞的影响 目 录 摘要 ．i ABSTRACT iii 第一章文献综述 ．．1 1前言日U舌 ．．1．．1 2肌肉形成概述 ．．1 2．1成肌细胞的来源及分化 ．1 2．2成肌细胞的融合与迁移 ．3 2．3肌肉相关遗传病 6 3 miRNA研究进展 ．．6 3．1 miRNA及其作用方式 6 3．2 miRNA在肌肉中的研究进展 7 3．3有关rfftRNA的必威体育精装版发现 ．．8 3．4 miR．340．5p研究进展 ．8 4研究目的与意义 10 第二章材料与方法 1l l材料 l 1 1．I主要仪器与设备 ．．11 1．2主要试剂及试剂盒 ．．12 1．3常用化学试剂及其配制 13 1．4载体、菌株和细胞系 ．．15 1．5主要分子生物学软件及数据库 15 2方法 16 2．1 YUTR的pmirGLO荧光报告载体的构建 16 2．2突变型3UTR的pmirGLO荧光报告载体的构建 ．．23 2．3 C2C12细胞培养和转染 ．．25 2．4荧光活性的检测 ．．26 2．5总RNA和蛋白质的提取 26 万方数据 华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文2．6 华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文 2．6 miR-340-5p的qRT-PCR分析 ．28 2．7相关基因的qRT-PCR分析 ．30 2．8 Western Blot检测相关基因的蛋白 ．32 2．9免疫荧光检测 ．33 2．10 xCELLigence系统细胞增殖实验 ．．34 2．1l细胞迁移检测 35 第三章结果 37 1 miR-340．5p对Bai3的影响 37 1．1免疫荧光检测miR一340．5p对C2C12细胞融合的影响 37 1．2 miR-340—5p以及其靶基因的生物信息学分析 38 1．3转染mimics或inhibitor后miR-340—5p的表达量变化 40 1．4 Bai3 3’UTR双荧光素酶报告载体的构建以及双荧光检测结果分析 ．41 1．5荧光定量PCR检测miR．340—5p对Bai3的调控作用 43 1．6 Western Blot检测miR．340—5p对Bai3的影响 45 2 miR-340．5p对ROCKl的影响 ．．45 2．1 miR-340—5p对C2C12细胞增殖的影响 ．．45 2．2 miR-340．5p对C2C12细胞迁移的影响 一46 2．3 ROCKl 3UTR双荧光素酶报告检测结果分析 ．．47 2．4 miR-340．5p对ROCKl基因表