miR367在RYR3基靶序列的多态性影响乳腺癌的发病风险 钙化和预后.docx

天津医科大学博士学位论文中文摘要 天津医科大学博士学位论文 中文摘要 乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一。单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)会影响癌症的发病风险和预后，但机制尚不是很清楚。微 小RNA(microRNAs，miRNA)是一类高度保守的，内源的，单链非编码核苷酸序 列，miRNA通过调节基因的表达参与了很多生物学过程，包括细胞增殖、细胞 凋亡和肿瘤的形成。miRNA通常结合于靶基因mRNA的3’端非翻译区 (3-untranslated region，3’UTR)区域，来剪切mRNA或抑制mRNA的转录。研 究者发现有越来越多与癌症和药物敏感性有关的多态位点是位于miRNA靶基因 3UTR的SNP，推测其原因是miRNA与不同基因型的3UTR结合能力有区别。 位于miRNA靶基因3qJTR结合区域的SNP代表了一类能调节miRNA与靶基因 环路的遗传变异。以碱基互补原理为基础的生物信息学分析已经预测了一系列 miRNA靶结合区SNPs，为进一步功能验证和病例对照研究提供了候选位点。 目的 近来，发现有一类单核苷酸多态位点通过影响miRNA对靶基因的调控，来 影响癌症的发病风险和预后。在本项研究中，我们通过检测位于miR-367靶基 因RYR3 3UTR结合区域的多态位点rsl044129的基因型，来探究钙离子释放通 道基因RYR3 3UTR的SNP是否与乳腺癌的发病风险性、乳腺癌钙化和预后相 关。从功能上验证miR-367与靶基因是否结合，rsl044129多态位点是否能影响 miR-367对RYR3的调控，探究RYR3在乳腺癌细胞中发挥的重要作用和对临床 医学的指导意义。 方法 这是一项以中国妇女为对象的病例．对照研究，对1532名乳腺癌患者和1605 名健康人进行了SNP rsl044129基因型检测。非条件logistic回归分析得出调整 畔 前后的比值比和95％可信区间。采用Kaplan．Meier曲线和Cox多因素分析评价 ， 不同基因型的生存状况。热力学模型预测和报告基因实验用来验证rSl044129对 miR-367与RYR3结合的影响。在RYR3机制研究中，应用MTT实验检测细胞 增殖，划痕实验评价细胞迁移，荧光染料法检测细胞内钙离子浓度。 结果 rsl044129 G等位基因型可以增加乳腺癌的发病风险(aOR，1．26；95％CI， 1．02-1．54)，并与乳腺癌钙化相关(Ok 1．52；95％CI，1．21．1．90)。生存分析显示 天津医科大学博士学位论文G等位基因型的乳腺癌患者预后差(P=0．036)。基于R豫3 天津医科大学博士学位论文 G等位基因型的乳腺癌患者预后差(P=0．036)。基于R豫3 mRNA 3UTR和 miR．367碱基互补原则和二级结构原理的热力学模型的预测结果显示miR-367与 A基因型的结合能力高于G基因型。通过荧光素酶报告基因证实了rsl044129 对miR-367与RYR3结合的影响。并在功能实验中发现RYR3作为钙离子通道 对乳腺癌细胞生长、迁移、细胞内钙离子浓度的影响和细胞形态学的改变。 结论 rsl044129多态位点是一个新发现的影响miRNA调控靶基因的SNP，与响乳 腺癌的发病风险、乳腺癌钙化和预后密切相关。 产矗 罐曩一j。 、葺 簪零 毹幽 哆妒 关键词：单核苷酸多态性乳腺癌微小RNA结合位点兰尼碱受体钙通道 II 天津医科大学博士学位论文Abstr 天津医科大学博士学位论文 Abstr act Breast caIlcer is one of the most C01Tlmon malignant disease in women．Single nucleotide polymorphisms(SNPs)have been shown to impact both cancer risk and cancer prognosis although the underlying mechanism is largely obscure．MicroRNAs (miRNAs)are evolutionarily conserved，endogenous，single—stranded，non-coding RNA molecules that are reported to be involved in many biological processes， including cell proliferation，apoptosis，and tumorigenesis，through their regulation of gene expression．Most miRN