h-FABP与h-FABPcTnI试纸条的制和性能指标的检测.docx

独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究 独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究 工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构 的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己 在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：万玖粕 ≯D》g年s只Ⅸ日 万方数据 学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版) 学位论文版权使用授权书 江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版) 电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、 缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致， 允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国 学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂 志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。 论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生院办理。 本学位论文属于不必威体育官网网址√ 心 作群戳名 柏 虢令啼 如临净E 鲺月 、●-^ 妇 乏olS年6民啸 万方数据 H_FABP与H_FABP／cTnI试纸条的制备和性能指标的检测摘要 H_FABP与H_FABP／cTnI试纸条的制备和性能指标的检测 摘要 心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)是低分子量的新型小细胞质的蛋白质，在 正常情况下，血浆中浓度很低，在急性心肌梗死(AMI)发生1．5h后，血浆中 H．FABP浓度急剧上升，因此可用于AMI早期诊断的标志物；同样心肌钙蛋白I (cTnI)在健康人血液内不含或含有很少量，但在心肌受损后，特别是AMI发 生后，cTnI能迅速地释放入血，3～6h出现异常增高，因此可用于AMI中期诊断 的标志物。本课题主要是研究胶体金试纸条在即时检验(Point-of-Care Test， POCT)中的应用，将H．FABP单克隆抗体或者将H．FABP／cTnI单克隆抗体包被 在一个试纸条上制备胶体金免疫层析试纸条，该试纸条由胶体金作为标记物，运 用双抗夹心法原理，NC膜上的T线颜色会随着待测样品中的抗原浓度升高而变 深来对AMI进行定性实验，借助胶体金定量仪可以对H．FABP和cTnI进行定量 检测。本课题探讨了胶体金优化的制备工艺，H．FABP胶体金试纸条的制各和性 能指标的检测以及H—FABP／cTnI二联试纸条的制备和性能指标的检测。 第一部分综述 综述分为3个部分：第一部分主要是介绍POCT的发展状况和应用技术；第 二部分是介绍胶体金的发展、原理和制备方法，以及胶体金免疫层析技术的原理、 分类、优点和应用；第三部分是H．FABP和cTnI的简介和意义的介绍。 第二部分H—FABP胶体金免疫层析试剂条处方工艺的研究 本部分探索了胶体金制备的优化工艺，对胶体金与蛋白结合的单因素进行了 考察以及分析样品垫和结合垫预处理液及金标恢复液，筛选合适的制备试纸条的 材料，制备出性能优良的胶体金试纸条。 第三部分H．FABP胶体金试纸条性能指标的检测 主要对心型脂肪酸结合蛋白(H．FABP)胶体金免疫层析试纸条的性能指标 进行了检测，结果表明层析速度为16．68mm／min，最低检测限是小于O．01I．tg／mL， H-FABP的浓度在0．01—199／mL具有良好的线性关系，准确度的相对偏差为 ．O．399％，精密度均小于15％，试纸条应在20。C～30。C检测，储存温度为20。C左 右，待测样品用量为709l，抗凝剂和不同样本对检测结果无干扰，临床小样本结 果表明阳性和阴性的符合率达100％，H．FABP胶体金试纸条检测结果与省内三 万方数据 江苏大学硕士学位论文甲医院的临床检测结果一致。 江苏大学硕士学位论文 甲医院的临床检测结果一致。 第四部分H-FABP／cTnI二联试剂条的制备和性能指标检测 本部分是H—FABP／cTnI二联胶体金试纸条的制备和性能指标检测，先分别 将H—FABP和cTnl的单克隆抗体l与胶体金结合，再喷涂在经预处理的结合垫 上，37。C烘干待用；cTnI和H．FABP的单克隆抗体2分别包被在Tl线和T2线， 37。C烘干待用，最后按第二章一4样组装试纸条，实验结果表明这两种蛋白之间没 有交叉反应。同样对该二联试纸条的性能进行了检测，实验结果表明层析速度为 16．43 Imm／min，H-FABP和cTnI的最低检测限分别小于lOng／mL和0．3ng／mL， H·FABP的浓度在10-1000ng／m