HAaseHACD44径在口腔鳞癌增殖和侵袭中作用机制的研究.docx

中山太学硕士论文HAase—HA—CD44途径在口腔鳞癌增殖和侵袭中作用机制的实验研究 中山太学硕士论文HAase—HA—CD44途径在口腔鳞癌增殖和侵袭中作用机制的实验研究 中文摘要 HAase．HA．CD44途径在口腔鳞癌增殖和 侵袭中作用机制的研究 专 业：口腔临床医学 硕士生：王敬旭 指导老师：廖贵清主任医师 摘要 研究背景 口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma，OSCC)是人类常见的头 颈部恶性肿瘤。资料显示，在头颈部恶性肿瘤中超过80％的I期(美国AJCC分 期)和超过60％的II期患者能够治愈，而III、IV期的治愈率仍不足30％，一 旦发生淋巴结转移，不管原发灶如何，预后都较差。同全身其他恶性肿瘤一样， 早发现、早治疗是OSCC患者得以成功治疗的关键。 近来的研究发现，透明质酸(hyaluronic acid，HA)和透明质酸酶 (hyaluronidase，HAase)在恶性肿瘤患者的体液(血清、腹水)和排泄物(唾 液、尿液)中明显升高，经统计学分析具有高度的灵敏性和特异性，是理想的肿 瘤标记物。而且HA被HAase分解后的寡糖片断，与细胞表面的CD44分子结合 后，能显著增强肿瘤细胞的活动性，还具有很强的促血管生成能力，对恶性肿瘤 的浸润、扩散和转移具有重要影响，HAase被称为“扩散因子”(spreading factor)。 本课题拟对口腔鳞癌患者唾液中的HAase活性进行检测，评估将其作为口腔 鳞癌诊断标记物的可行性；在此基础上，提出HAase．HA．CD44途径可能在口腔 鳞癌细胞的增殖和侵袭中发挥重要作用，并通过体内、外系列的研究加以验证。 进一步深入探讨HAase—HA．CD44途径在恶性肿瘤生长和侵袭中作用机制，为口 中山太学硕士毪文HAase—HA．CD44途径矗口腔鳞痛增精和侵袭中作用氍捌静实验研究 中山太学硕士毪文HAase—HA．CD44途径矗口腔鳞痛增精和侵袭中作用氍捌静实验研究 中文攘要 腔鳞瘸的诊断和治疗开辟一条新途径。 第一部分HA、HAase和CD44在口腔鳞癌中表达 及其l赫蓑意义 l材料和方法 零实验分剐疵鞘ELISA．1ike法检测西黢鳞癌患者唾液中HAase髂活馁； R-T_PCR、免疫组织化学技术检测人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中HAase、CD44s 茅ⅡCD44v6的mRNA和蛋白表达；免疫组织饿擎技术检测人疆腔鳞状缨飚癌组织 中HAase、CD44s和CD44v6的骚白表达；著分析以上指标与嚣申瘤生物学行为之闯 的关系。 2结果 2．1阴腔鳞癌患者噬液中HAase的活性为良性肿瘤患者和正常个体的2．3倍，而正 鬻个侮与莛毪爨癣患者之闻无黧蓉差舅。数5。0 mU／ml轰器燕，投据HA85e戆活洼 检测豳腔鳞癌的灵敏度为79．2％，特异度为65．O％；HAase活性与口腔鳞癌临床 分期和颈淋巴转移正相关(P0．01)，而与病理分级无关(P0．05)。 2．2 CD44s葙CD44v6在TeaSll3缓麓蟊正露人弱上疫缨魏貘帮菝貘均蠢铰强表 达。CD44s mRNA、CD44v6 mRNA和HAage mRNA的半怒麓检测表明，Tca8113 细胞和正常人上皮细胞内CD44s、CD44v6表达强度无显鬻差异；HAase主要在 ＆鹞113绍憨帮正鬻久主疫缨憨瓣浆悫表这，蠢TcaSll3鬃魏内HAase熬浚达强度 比相对应的正常人上皮细胞内HAase的表达强度显著增高。 2．3猩肿瘤周围“正常”口腔粘艨上皮内，CD44s、CD44v6主要表达于旗底细胞 瑶及邻近绥魔静豫貘上，大黎分鳞凌绥魏瘗戆潼缨庭染惫黼性，疆夔表逡与日蕴 鳞癌的病理学分级、临床分期及颈淋巴转移凭关(P0．05)；HAase主疆存在于 细胞的胞浆中，在肿瘤细胞中袭达较肿瘤周阑“正常”细胞强。HAase阳性表达与 墨藏鳞癌静瘸瑾学分缀受相美f PO。05)，与日整鳞癌鹣颓漤巴结转够正相关 (P0．05)，与临床分期无关(P0．05)。 一H一 中山太拳硕士论文HAase·HA-CD44途径在口腔鳞癌增殖和侵袭中作用机制的实验研究 中山太拳硕士论文HAase·HA-CD44途径在口腔鳞癌增殖和侵袭中作用机制的实验研究 中文摘要 3结论 3．1 以唾液qbHAase的活性为标记物检测口腔鳞癌，目前不能做为口腔鳞癌诊断 的独立指标。 3．2 HAase在肿瘤细胞中表达较肿瘤周围“正常”细胞强，并与肿瘤的生长和侵袭 密切相关。 3．3 CD44s和CD44v6分子在正常细胞和肿瘤细胞表面均有表达，但无显著性 差异。 第二部分HA．I认ase．CD44途径与Tea8113细胞增殖、粘附 的相关性研究 1材料和方法 本部分实验旨在通过引入Matrigel基质胶在