hADSCs肝样分 标记及Caveolin1在分化中的作用.docx

辽宁师范大学硕士学位论文手商 辽宁师范大学硕士学位论文 手商 要 终末期肝病是由多种急慢性肝病导致的临床综合征。应用干细胞再生产生正常肝细 胞代谢功能的“肝脏组织”，进行体外支持或体内植入，可以解决肝脏来源的疑难。 脂肪间充质细胞(ADSCs)作为自体细胞移植的种子细胞在再生医学中发挥着重要 作用。由于能在体外培养稳定扩增，并在体内和体外分化成为肝细胞，ADSCs可以作 为自体干细胞治疗肝脏疾病的种子细胞。 Caveolin一1(窖蛋白一1，Cav。1)是组成胞膜窖的主要功能蛋白。由于在脂滴和新生 细胞膜的形成以及肝再生的能量供应中发挥着重要作用，因此是Cav—l肝再生所必需的 蛋白。然而，Cav一1是否参与并影响ADSCs向肝细胞分化这一过程尚不明确。 目的：本论文以人脂肪间充质干细胞为实验对象，利用生长因子联合诱导技术建立 肝样细胞模型，通过检测干细胞向肝样细胞诱导过程中Cav一1蛋白的表达，初步探讨 Cav一1在肝样细胞诱导分化过程中的作用及介导的相关信号途径，旨在了解干细胞向肝 细胞诱导分化的机制。 方法：1、分离、提取及培养人源脂肪间充质干细胞并鉴定其性质。2、通过HGF、 bFGF、EGF和Dex联合诱导，免疫荧光及R’F。PCR方法对诱导细胞进行鉴定。3、体外 MR评估自合成SPIO作为干细胞移植的MR活体内示踪的安全性和有效性。4、Western Blot方法检测不同诱导时期肝样细胞中Cav一1、ER—a36及MAPK信号通路蛋白表达。 结果：1、分离提取了hADSCs，通过性质的鉴定表明，提取的hADSCs较为原始， 干性强，具有多项分化的能力。2、生长因子联合诱导建立了肝细胞样模型，发现随诱 导时间的延长，干性基因Oct4、Nanog表达量逐渐减少；ALB、CYPlAl、HNFlA、HNFlB 等基因表达量逐渐增多；AFP表达先增高再降低。说明干细胞向肝样细胞分化诱导成功。 3、自合成SPIO对脂肪间充质干细胞标记，在25 gg／mL浓度时细胞的增殖水平__E常， 且在MR检测上具有显著性差异。4、在hADSCs肝样分化的过程中Cav一1蛋白和MAPK 信号通路蛋白表达逐渐增高。Cav一1及ER一0【36表达随诱导时间的延长显著增高，在诱 导7 day时MAPK信号通路被激活。 结论：自脂肪组织内提取足够数量的脂肪间充质干细胞，并可在体外获得稳定、可 持续的扩增，并具有多项分化的能力；MAPK信号通路介导了hADSCs向肝样细胞分化 过程，且Cav一1在这一过程中起到关键性作用；自合成纳米磁性四氧化三铁可以作为脂 肪间充质干细胞标记物。 关键词：人脂肪问充质干细胞；肝细胞诱导分化；纳米磁性四氧化铁；Caveol in一1 hAMSCs hAMSCs Hepatogenic Induction，Label，and The Role of Caveolin一1 in hAMS Cs Hepatogenic Induction Abstract Liver transplantation(LT)is the only currently effective therapy for end—stage liver disease and severe acute liver failure，but its use is limited by high cost and a shortage of allografls．Therefore，researchers are focusing on differentiation of human stem cells towards hepatocytes as an alternative cell source for liver—based cell therapies． Human adipose—derived stem cells(hADSCs)have been proved to be an attractive candidate for autologous cell transplantation source for regenerative medicine．Thev can be obtained repeatedly，in large quantities，and in a more convenient，safe，and less Dainful wav． Recently，ADSCs were reported to be able to differentiate into hepatocytes both in vitro and in vivo．Therefore，ADSCs represent a potential sour