HBV感染不同状态下树突状细胞的生物学研究-内科学专业业论文.docx

培养基(iJHGM．CSF矛NIL一4)诱导人的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)来培养DCs， 24小时后可见贴壁单核细胞聚集 成大小不等葡萄串状，粘附于培养板底，第3天可见这部分细胞体积增大， 第4天可见部分细胞悬浮于细胞培养液，第5天可见这部分细胞数目增多， 部分细胞出现许多毛刺。第7天培养液中飘浮着大量有明显树突状的大个 细胞或细胞团。将培养7天的DCs收集在透射电镜下观察，每个视野充满 DCs，可见细胞体积较大，细胞表面突起比较丰富，胞浆内粗面内质网丰 富，线粒体结构较清楚，溶酶体丰富，核大而圆，核膜清晰，染色质分布 较均匀。慢性乙型肝炎患者及HBV携带者HLA．DR、CD80和CD86的表 达率较正常对照组普遍降低，但HLA．DR、CD80和CD86的表达水平在慢 性乙型肝炎患者及HBV携带者之间的差异无统计学意义。ELISA检测培养 第7天DCs上清IL．12水平，发现在DCs培养上清液中，IL．12的表达水平在 慢性乙型肝炎患者及携带者明显低于正常人，而慢性乙型肝炎患者与携带 者之间则无明显差异。 (2)对12例慢性乙型肝炎血清HBV—DNA阳性患者及10例血清 HBV．DNA阴性患者外周血来源DCs内的HBV．DNA进行检测发现：12 例血清HBV—DNA阳性患者，其中有7例其DCs内可检测到HBV．DNA， 5例DCs内未检出HBV．DNA，DCs内HBV．DNA检出率为58．3％。流式 细胞仪分析显示，正常人的皿A．DR、CD80和CD86的表达阳性率均 在58％以上，而慢性乙型肝炎血清HBV-DNA阳性组及血清HBV-DNA 阴性组HLA—DR、CD80和CD86的表达率较正常人组普遍降低，尤以 血清HBV-DNA阳性组下降更为明显。7例DCs HBV-DNA阳性组及15 例DCs HBV-DNA阴性组甩A．DR、CD80和CD86的表达率亦较正常 II  人组普遍降低，尤以DCs HBV-DNA阳性组下降更为明显。DCs培养上 清IL．12水平在血清HBV-DNA阳性组明显低于血清HBV-DNA阴性组及 正常人组，血清HBV-DNA阳性组又低于血清HBV-DNA阴性组。而IL．12 的表达水平在DCs HBV-DNA阳性组明显低于DCs HBV-DNA阴性组及 正常人组，DCs HBV-DNA阴性组又低于正常人组。相关分析显示，DCs 表面分子的表达及DCs分泌IL一12水平与血清及DCs HBV载量均呈显著 负相关。 (3)将培养第6天的DCs，加入CpG ODN继续培养24d,时后，透射 电镜观察CpG ODN刺激后DCs与完全培养基对照组DCs相比，其表面的 突起丰富、增粗，粗面内质网增多，空泡减少甚至消失。用流式细胞仪分 析显示，CpG ODN束U激组CD80、CD86及HLA．DR的表达阳性率在慢性乙 型肝炎组、HBV携带者组及正常人组均完全培养基对照组明显升高。完 全培养基对照组甩A．DR、CD86、CD80的表达阳性率在慢性乙型肝炎组、 携带者组及正常人组之间比较发现：慢性乙型肝炎组及携带者组 HLA．DR、CD86、CD80的表达阳性率较正常人组明显下降，但慢性乙型 肝炎组和携带者组之间比较却无显著性差异。CpG ODN束IJ激组皿A．DR、 CD86、CD80的表达阳性率在慢性乙型肝炎组、携带者组及正常人组之间 比较发现：慢性乙型肝炎组甩A．DR、CD86的表达阳性率较携带者组及 正常人组明显下降，但携带者组和正常人组之间比较却无显著性差异；慢 性乙型肝炎组及携带者组CD80的表达阳性率正常人组明显下降，但慢性 乙型肝炎组和携带者组之间比较却无显著性差异。ELISA检j贝JJCpG ODN 刺激组及完全培养基对照组IL．12的水平，发现CpG 0DN刺激组DCs分泌 IL．12的水平无论在慢性肝炎组、携带者组及正常人组均较完全培养基对 III  照组明显升高。完全培养基对照组及CpG ODN束IJ激组DCs分泌IL．12水平 在慢性乙型肝炎组、携带者组及正常入组之间比较发现：慢性乙型肝炎组 及携带者组DCs分泌IL．12水平较正常人组明显下降，但慢性乙型肝炎组和 携带者组之间比较却无显著性差异。 结论(1)慢性乙型肝炎患者及无症状携带者均存在着DCs表型和功 能的缺失。 (2)慢性乙肝患者外周血DCs亦能受到HBV的感染，而且 DCs的表型以及分泌IL．12能力与血清及DCs内HBV载量均呈显著负相 关关系。 (3)CpG ODN能够明显促进慢性乙型肝炎患者外周血DCs成 熟，为CpG ODN成为治疗慢性乙型肝炎的一种新方法提供了实验基础。 关键词外周血单个核细胞，树突状细胞，慢性乙型肝炎，非甲基化 CpG基序，