HBXIP降低乳腺癌细胞辐射敏感性的研究-放射医学专业毕论文.docx

第二章HBXIP调节丫射线照射后乳腺癌细胞中XIAP的表达 第二章HBXIP调节丫射线照射后乳腺癌细胞中XIAP的表达 29 1实验材料 ．．29 1．1细胞系 29 1．2质粒与siRNA片段 ．29 1．3引物 ．29 2主要试剂和耗材 ．．30 2．1细胞培养用品 30 2．2其它试剂 30 2．3主要耗材 ．3 1 2．4．溶液配制 3 1 2．5主要仪器 33 3实验方法 一34 3．1细胞培养和冻存 34 3．2细胞转染 35 3．3 PCR 37 3．4 Western blotting ．．38 3．5 Y射线照射 ．40 3．6统计方法 40 4实验结果 ．．41 4．1 HBXIP表达对y射线照射后乳腺癌细胞MDA-MB一23 1细胞中 凋亡相关基因表达的影响 ．．41 4．2 HBXIP对丫射线照射后乳腺癌MDA-MB．23 1细胞中XIAP表 达的影响 41 4．3 HBXIP对1，射线照射后乳腺癌MDA-MB．23 1细胞中NF—r．B表 达的影响 43 4．4 HBXIP通过NF柚信号通路调节1，射线照射后的乳腺癌MDA- MB．23 1细胞中XIAP的表达 45 5讨论 ．46 第三章HBXIP通过NF-rd3／XIAP信号通路调节乳腺癌细胞的辐射敏感性． ．．48 1实验材料 ．．48 1．1细胞系 48 1．2质粒与siRNA片段 ．48 1．3引物 48 万方数据 2主要试剂和耗材 2主要试剂和耗材 ．．48 2．1细胞培养用品 48 2．2其它试剂 49 2．3主要耗材 50 2．4溶液配制 50 2．5主要仪器 52 3实验方法 ．．53 3．1细胞培养和冻存 53 3．2细胞转染 53 3．3 PCR 55 ：；．4 Western blotting ．．57 3．5 Y射线照射 ．59 3．6 MTT实验 ．59 3．7克隆形成实验 60 3．8流式细胞术检测细胞凋亡 60 3．9统计方法 60 4实验结果 ．．6l 4．1 HBXIP通过NF．r,B／XIAP信号通路调节1，射线照射后MDA． MB．231细胞的增殖 61 4．2 HBXIP通过NF．rd3／XIAP信号通路调节丫射线照射后MDA． MB．23 l细胞的克隆形成能力 63 4．3 HBXIP通过NF—r,B／XIAP信号通路调节丫射线照射后MDA． MB．23 1细胞的细胞凋亡 64 4．4 XIAP和NF．r,B在辐射耐受的乳腺癌细胞中的表达 65 5{寸论 ．66 第四章HBXIP在动物体内通过调节XIAP的表达影响乳腺癌细胞的辐射敏 感性 68 1实验材料 ．．68 1．1细胞系 68 1．2质粒与siRNA片段 ．．68 2主要试剂和耗材 681 2．1细胞培养用品 68 2．2其它试剂 68 2．3主要耗材 68 万方数据 2．4溶液配制 2．4溶液配制 68 2．5主要仪器 68 3实验方法 一69 3．1细胞培养和冻存 69 3：2细胞转染 69 3．3裸鼠成瘤 69 ：；．4 Western blotting ．．69 3．5丫射线照射 ．71 3．6统计方法 7l 4实验结果 72 4．1动物体内移植瘤的生长曲线 ．72 4．2动物体内种植成瘤的重量 73 4．3动物体内种植瘤的外观 74 4．4动物体内移植瘤中HBXIP和XIAP蛋白的表达 ．74 5讨论 ．75 第五章结论 76 参考文献 。77 综述 ．8 1 肿瘤干细胞与辐射抗性的研究进展 ．．8 l 致谢 9l 独创性声明 ．．92 万方数据 北京协和医学院中国医学科学院 北京协和医学院中国医学科学院 硕士学位论文 摘要 目的：乙肝病毒X蛋白连接蛋白(HepatitisBX．interactingprotein；HBXIP) 在乳腺癌的发生、生长和转移过程中扮演着重要的角色。本文旨在探究HBXIP 对乳腺癌细胞辐射敏感性的影响。 方法：(1)在乳腺癌MDA．MB．23 1细胞中转染pCMV-HBXIP质粒或HBXIP siRNA建立过表达或干扰HBXIP的乳腺癌细胞系。利用MTT和克隆形成实验 探讨HBXIP对电离辐射诱导的乳腺癌细胞增殖能力的影响。利用流式细胞术确 定HBXIP对电离辐射诱导的乳腺癌细胞凋亡的影响。利用Western blotting和 PCR实验通过检测衄XIP在蛋白和mRNA水平的表达确定pCMV-HBXIP质粒 和HBXIP siRNA的转染效率，确定HBXIP在辐射耐受的乳腺癌细胞和野生型乳 腺癌细胞中表达的差异。(2)在乳腺癌MDA-MB．23 1细胞系中单纯转染pCMV- HBXIP质粒或HBXIP siRNA建立过表达或干扰HBXIP的