Mocsin在人脑形细胞瘤中的表达和意义及其对U51细胞增殖和侵袭的影响.docx

原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢 的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不 包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我 共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。 作者签名： 关于学位论文使用授权说明 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位 论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论 文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。 年坐月丝日 ● .. 4I ! ? ? 中南大学博士学位论文 中南大学博士学位论文 中文摘要 中文摘要 第一章Moes i n在人脑星形细胞瘤的表达及意义 目的：探讨膜结构伸展刺突蛋白(Moesm)在人脑星形细胞瘤中的表达及意 义。 方法：应用免疫组织化学SP方法，检测56例人脑星形细胞瘤和10例正常 脑组织中Moesm和Phospho．Moesm的表达，应用RT-PCR测定15例新鲜人脑 星形细胞瘤和2例正常脑组织中Moesm的mRNA，并结合临床随访资料分析表 达水平与星形细胞瘤临床预后的相关性。 结果：Moesm的阳性表达率在人脑星形细胞瘤组96．4％(54／56)和正常脑 组织对照组O％(o／10)之间有统计学差异(尸o．01)。I．IV级星形细胞瘤中Moeisn 的强阳性表达随肿瘤分级上升而增高(贮=33．93，P0．01)，Phospho—Moesm的表 达结果与Moesm的结果基本一致。RT-PCR检测正常脑组织，I．II级星形细胞瘤， 和III．Ⅳ级星形细胞瘤3组之间Moesm的mRNA表达依次增高，表达水平之间 有统计学差异(F=66．133§ig--0．000)。结合临床病理资料分析发现Moesm的强 阳性表达和星形细胞瘤分化之间有统计学意义(尸O．01)。Moesm强阳性表达组 患者比弱阳性+阴性表达组患者的术后无瘤生存时间短，其差异有统计学意义 (Z2=29．85，P=0．000)。 结论：Moesm的表达水平与人脑星形细胞瘤的恶性程度密切相关，Moesm 的过度表达对星形细胞瘤发展和预后起重要作用，提示Moesm可以作为反映星 ◆ 形细胞瘤预后的一种有价值的分子标志物。 关键词 星形细胞瘤，膜结构伸展刺突蛋白，预后 中南大学博士学位论文 中南大学博士学位论文 中文摘要 第二章siRNA干扰下调Moesin表达对U251细胞生长和侵 袭能力的影响 目的：本研究旨在探讨RNA干扰(gNA interference，RN凡)对人脑胶质细胞瘤 (U251)中Moesin蛋白基因表达的抑制作用及其对U251细胞生长、侵袭的影响。 方法：以人脑胶质细胞瘤U251细胞系为研究对象，针对Moesin编码基因设计 小干扰RNA(siRNA)片段，转染入细胞，通过逆转录聚合酶链反应(RT．PCR)筛选沉 默效率最高的siRNA片段，并用Western Blot技术定量转染后U251细胞的Moesin 蛋白的表达水平。转染后以MTT法检测增殖能力，流式细胞术检测细胞的凋亡 水平，Transwell法检测侵袭能力的变化，并以扫描电镜观察转染后的细胞形态变 一 化。 结果：RT．PCR和Western-blot筛选出MOESIN．1 39片段沉默效果最好，siRNA 转染后U25 1细胞生长速度减慢，在转染48h时，siRNA组的U25 1细胞明显生长速 度低于空白组和阴性对照组(尸o．01)，同时凋亡率上升，siRNA组平均凋亡率 为(17．30-a：2．01)％，远高于空白组平均凋亡率l(1．95+0．33)％，阴性组平均凋亡率 但．02．-4-0．28)％(Po．01)。siRNA转染后的U251细胞穿过聚碳酯膜的细胞数量也 明显减少，由空白组26．47士4．07和阴性组的24．27±3．63减少到转染组的11．53± 2．61(P0．01)。细胞形态发生改变，细胞表面伪足数由空白组的14．2±2．58， 阴性组的15．8±1．30下降至转染组的6．6±1．82(尸0．01)。 结论：siRNA下调Moesin的表达能有效抑$UU251细胞的生长，减低其侵袭性； Moesin有可能成为治疗人脑胶质瘤的靶点分子。 关键词：Moesin；siRNA；U251细胞 ● Ⅱ 一 中南大学博士学位论文 中南大学博士学位论文