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HIF1α肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制
河北医科大学
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矿g年;月岁f日
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研究生签名:接宁 翩虢蝴
矿g年 ≥月易7日
中文摘要F-1
中文摘要
F-1 Q对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制
摘 要
目的:肝细胞肝癌(human hepatocellular carcinoma HCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一,恶性程度高,易侵 袭转移,预后差,因而探索肝细胞癌的发病及侵袭转移机 制是临床研究的一大挑战。肝癌生长速度快,造成局部组 织严重缺氧,缺氧状况下中肿瘤仍能不断增殖,浸润,极 易侵袭转移和复发,这也是肝癌研究的重点及临床治疗的 难点,但肝癌侵袭转移的机制尚不清楚。此过程中起关键
作用的是缺氧诱导因子.1(hypoxia inducible factor-1 HIF—1)。HIF一1是迄今为止发现的唯一一个特异性缺氧状 态下发挥活性的转录因子。HIF一1 Q在肿瘤组织中广泛表 达,对维持肿瘤细胞的能量代谢、肿瘤血管生成、促进肿 瘤细胞增殖和转移起重要作用。本研究通过应用HIF一1 Q 抑制剂YC一1和HIF.1 Q的反义寡核苷酸分别处理 SMMC一7721肝癌细胞,观察不同药物浓度对肝癌细胞增 殖的作用和对SMMC一7721细胞周期及凋亡率的影响,榆 洲bcl一2,bax,survivin mRNA和蛋白表达量的变化,明确 缺氧诱导因子一1对肝癌细胞周期和增殖调亡影响及可能 机制,为明确肝癌侵袭转移的机制及采取相应的治疗措施 提供理论依据。
方法:肝癌细胞系SMMC一7721分对照组和试验组。 对照组细胞常规培养,试验组细胞分别施加HIF—l a抑制
中文摘要剂YC一1和HIF一1
中文摘要
剂YC一1和HIF一1 Q的反义寡核:f1:酸干预,设浓度梯度和 时间梯度。MrT方法检测不同药物浓度对SMMC一7721 细胞的增殖的作用;采用FCM检测不同时间点、不同药 物浓度对SMMC一7721细胞周期和凋亡率的影响;采用逆 转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,测定细胞bcl一2,bax, survivin mRNA表达的变化,以D.actin作为内参照标准, 通过凝胶扫描仪对扩增产物进行DNA电泳条带的光密度 值分析,将bcl一2,bax,survivin与$一actin比值作为bcl一2, bax,survivin m11NA表达水平的参数,对bcl一2,bax, survivin产物相对定量;以Western blot方法检测 SMMC一772 1细胞胞浆bcl一2,bax,survivin蛋白表达的变 化,同样以13一actin作为内参照标准,对bcl.2,bax,survivin 蛋白进行相对定量分析。所有数据均以i±S表示,采用 SPSS 1 3.0统计分析软件进行方差分析(GLM过程)检验, P0.05为有显著差异。
结果
1 MTT比色法显示:
1.1 YC—l对SMMC一772l细胞增殖具有抑制作用。不 同浓度YC一1处理细胞后,与对照组相比,各处理组OD 值均有显著下降,差异具有显著性(P0.05)。各实验组 间比较,差异亦具有显著性(PO.05)。YC.1处理细胞不 同时间后,与对照组相比,各处理组OD值均有显著下降, 差异具有显著性(P0.05)。各实验组间比较,筹异亦具 有显著性(P0.05)。随YC.1处理浓度的增大、作用时间 的延长,OD值显著下降,即YC.1对SMMC一7721细胞
2
中文摘要的增ji:c时印制作用呈明显的时间一剂量依赖效应,(P0.05)
中文摘要
的增ji:c时印制作用呈明显的时间一剂量依赖效应,(P0.05)
(Fig.2,‘lable 1)。
1.2 HIF.1 Cl的ASODN对SMMC.7721细胞增殖具有 抑制作用。不同浓度ASODN处理细胞后,与对照组相比, 各处理组OD值均有显著下降,差异具有显著性(P0.05)。 各实验组间比较,差异亦具有显著性(P0.05)。HIF一1 a 的ASODN处理
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