HnRNP L在前列腺癌增殖 凋亡中的调控作用及相关机制的研究.docx

硕士学位论文 一＼删 HnRNP L在前列腺癌增殖、凋亡中的调控 作用及其相关机制的研究 硕士研究生：周许敏 指导教师：毛向明 摘要 背景： 前列腺癌作为威胁男性健康的常见肿瘤，其发病率和死亡率呈现逐年上升 的趋势。目前，据有关报道，前列腺癌的发病率居全球男性所有恶性肿瘤发病 率的第二位，死亡率居第五位。我国前列腺癌的发病率与死亡率虽比其他发达 国家低很多，但近年来随着社会的进步、人口的老龄化、人们饮食习惯的改变 以及医疗条件的改善呈现明显上升的趋势，己严重威胁我国男性的身体健康。 由于我国幅员辽阔，有很多地方的就医环境不太理想，目前临床上发现的晚期 前列腺癌较多，尽管随着我们国内医生对前列腺癌认识的不断提高，各种检查 手段，如PSA、B超检查，以及不断地宣传，公众对健康知识认知程度的提高， 现在越来越多比较早期的前列腺癌患者被发现，但效果依旧不尽人意，在临床 治疗方面也存在效果不佳的情况。目前前列腺癌的发病机制也不甚清楚。因此， 对前列腺癌的发病机制进行深入的研究，寻找特异性和敏感性都较好的前列腺 癌分子标志物以及有效的治疗靶点，对我国前列腺的临床诊断和治疗都具有非 常重要的科学研究价值。 我国学者韩赵东等在最近研究中应用基因芯片以及双向电泳和质谱分析的 方法鉴定出了前列腺癌中的2566种肿瘤蛋白，进一步通过生物信息学分析发现 了60个差异性表达的肿瘤蛋白，其中有37个表达上调，而23个表达下调。而 万方数据  中文摘要 其中在前列腺癌中表达存在明显差异性的有14种基因及其蛋白产物(ACLY， CAPG，GSTM3， GSTPl，HNRNPL，IMPDH2， KRTI 5，MCCC2，MSN， MYL9，PYGB，SERPINB5，TRAPl andVCL)。HnRNP L全称是核内不均一核 糖核蛋白L，其系hnRNP家族的一员。人HnRNP L定位于19q13．2，全长1759 bp，含有1 7个外显子。有研究报道，hnRNP家族中的各成员在DNA损伤修复、 转录、hnRNA剪接mRNA输送、降解等生物过程中发挥着重要作用。核内不 均一核糖核蛋白L(HnRNPL)最早是由Pin01．Roma S等在早期转录片段中意外发 现的核糖核蛋白，这种蛋白富含胱氨酸及脯氨酸，目前已知其与肺癌、肝癌、 结直肠癌等肿瘤的发生发展关系密切，而在本课题组前期研究中也发现其能够 影响生精细胞的增值和凋亡。已有研究报道hnRNP家族中的HnRNP K与前列 腺癌有着紧密的关系，可能参与调控前列腺癌的增殖和凋亡，但HnRNP L与前 列腺癌的关系罕见报道。 本研究首先探讨HnRNP L与前列腺癌患者的各项临床指标之间的关系，进 一步在体内外研究HnRNP L对前列腺癌增值、凋亡的影响并揭示其可能的分子 机制，最终阐明HnRNP L在前列腺发生发展中可能扮演的角色，并为前列腺癌 的临床诊断和治疗提供一种新的肿瘤分子标志物和治疗靶点。 目的： 1探讨HnRNP L与前列腺癌患者的各项临床指标之间的关系； 2通过体内外的功能实验阐明HnRNP L与前列腺癌细胞增殖、凋亡的关系； 3通过一系列分子生物学实验最终揭示HnRNP L在前列腺癌增殖、凋亡中可能 发挥的分子调控机制。 方法： l HnRNP L在前列腺癌组织中的表达情况以及与各项临床病理参数的关系 于西安艾丽娜生物有限公司购得一包含8l例前列腺增生症样本和99例前 列腺癌样本的组织芯片，通过免疫组化S-P法检测各个样本中HnRNP L的表达 情况，并结合各样本的各项临床病理参数，用相关统计学方法进行关联性分析； Il 万方数据  硕士学位论文 于南方医院泌尿外科收集得10对前列腺癌和癌旁配对组织，进行组织研磨提取 蛋白后进行WB检测10对配对组织中HnRNP L的表达情况。 2分别敲低和过表达HnRNP L在各前列腺细胞株中的表达，研究其对前列腺癌 增殖、凋亡水平的影响 首先，采用Q．PCR和WB检测HnRNP L在三株前列腺癌细胞株(PC3、 DUl45、Lncap)中的表达情况，筛选HnRNP L表达较高和较低细胞株，对表 达较高细胞株(DUl45)进行慢病毒敲低处理，对表达较低细胞株(Lncap)进 行慢病毒过表达处理，而对于中间表达细胞株(PC3)既进行敲低处理也进行 过表达处理；进一步通过cck．8实验、Transwell侵袭实验、平板克隆形成实验、 裸鼠皮下成瘤实验以及流式细胞术检测HnRNP L敲低或过表达前后，前列腺癌 细胞株增殖和凋亡情况的改变。 3 HnRNP L调控前列腺癌细胞增殖和凋亡的可能的分子机制 通过免疫荧光、CO．IP、RIP以及pull．down等实验方法检测HnRNP L与增 殖、凋亡通路中可能相互作用的蛋白或基因，进一步通过WB