HPPRRSV GD株强弱毒株抗原在染猪体内的动态分布研究.docx

HP．PRRSV HP．PRRSV GD株强弱毒株抗原在猪体内的动态分布研究 摘要 高致病性猪繁殖与呼吸综合征(Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome，HP．PRRS)是由美洲型PRRSV高致病性变异毒株引起的一种 急性高致死性疫病，自2006年爆发以来，给我国养殖业造成了非常严重的经济损失。 近年来，国内新爆发和流行的高致病性PRRS，主要以高热、流产、高发病率和高 死亡率为特征，是目前影响我国养猪业发展最重要的疾病之一。 目前，病毒基因亚型及血清型很多，同种但是不同致病力的病毒可以引起宿主 靶细胞产生不同的应答反应。传统灭活苗的保护力往往十分有限，不能达到预防 HP．PRRSV的效果。而新型弱毒疫苗保护的毒株和猪场的毒株不一定能形成交叉保 护，即使基因型差异很小，这是当前防控PRRS的最大难题。因此进一步研究开发 新型PRRS疫苗并制定出更加合理的防控方案对我国养猪产业意义重大。 本实验通过比较几株美洲株序列，选取ORF6和ORF7阅读框内保守区域，设 计引物和探针，建立RT-PCR方法和Taqman荧光定量PCR检测方法，结果显示特 异性、敏感性均良好，荧光定量PCR方法比普通PCR方法敏感10．100倍作用。 通过建立的RT-PCR方法和Taqman荧光定量检测方法研究本实验室培育的弱毒 疫苗株GDrl 80株和强毒GD株F5代在感染40日龄仔猪后抗原在猪组织器官中的 分布情况，以比较强弱毒株的组织嗜性差异，从而进一步揭示弱毒疫苗株的致病特 性变化机理。结果显示强弱毒株在组织和器官中的分布情况差异显著，分布范围以 及持续存留时间也有较大的不同。强毒株在第2周之前抗原分布范围最广，第2周 之后分布范围明显减少；相对于强毒株而言，弱毒株感染后在组织中出现时间相对 滞后，带毒时间主要集中在第2周至第3周之间，在第5周完全消失。从分布范围 来看，强毒株的组织嗜性范围较广，而弱毒株仅限于肺脏及淋巴结等组织。说明强 毒株在细胞传代过程中毒力下降的同时，组织嗜性的范围也明显缩小，这可能是病 毒与细胞的长期相互适应有关。 本实验对弱毒株GDrl80不同免疫剂量刺激产生PRRSV抗体产生结果进行了检 测，虽然用ELISA方法检测的是针对N蛋白的抗体，没有中和病毒的作用，但是与猪 体内的免疫反应有很大相关性。对最佳免疫剂量的选择具有重要意义，但最佳的免 疫剂量还有待于进一步的试验来确定。 关键词：HP．P砌塔V；动态分布；RT-PCR：FQRT-PCR 1 华中农业大学201 华中农业大学201 1届硕士学位论文 ABSTRACT Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome flip—PRRS)is an acute highly lethal disease caused by a highly pathogenic variant of American-type PRRSV strains．It has induced serious economic losses farming industry since 2006 the disease outbreaked in China．Clinical symptom mainly show fever,abortion，high morbidity and Iligh mortality characteristics in infected pigs．It is one of the most serious diseases in Chinas pig industry．Study results confirmed the characteristic gene lack of HP—PRRSV NSP2 region without relationship with their pathogenicity． At present，there are some genotypes and subtypes in PRRSV and different virulence virus can cause different responses to the host target．The protection of the traditional inactivated vaccine is often very limited in pigs，Can not preventing pigs from infection HP—-PRRSV．The cross-protection of HP··PRR