基因工程抗体演示文稿.pptVIP

制作人： 抗体研究的世代 第一代抗体:多克隆抗体（polyclonal antibody) 第二代抗体: 单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb) 第三代抗体 :基因工程抗体（genetic engineering antibody) McAb的一般过程(杂交瘤技术） 优点 ： (1)在体外“永久”地存活并传代 (2)特异性强、灵敏度高、产量大 (3)适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法 (4)可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗 （二）单克隆抗体的优点与局限性 局限性 ： 固有的亲和性弱；反应强度不如多克隆抗体； 制备技术复杂、费时费工、价格较高; 基因工程抗体(Genetic engineering antibody) 基因工程抗体兴起于20世纪80年代早期。这一技术是在充分认识Ig基因结构和功能的基础上，应用DNA重组技术和蛋白质工程技术，根据研究者的意图，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体，也称第三代抗体。在此主要就嵌合抗体、改型抗体、噬菌体抗体进行介绍。 （一）嵌合抗体 从杂交瘤细胞基因组中分离和鉴别出功能性VL和VH基因，与人Ig恒定区基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞，使之表达人-鼠嵌合抗体。 嵌合抗体优点： 减少了鼠源性抗体的免疫原性 保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力 （二）改型抗体 尽管嵌合抗体的免疫原性已降低很多，但有时它仍可能引发较强的免疫反应。为了进一步降低抗体的鼠源成分，发展出CDR移植技术。即把鼠抗体的CDR序列移植到人抗体的可变区内，所得到的抗体称CDR移植抗体或改型抗体，也就是人源化抗体。 特点：进一步减少嵌合抗体中的鼠源性成分，减弱可能发生的HAMA,但又具有鼠源性单抗特异性，有可获得人抗体亲和力的移植抗体。 随着PCR技术的发展，利用基因工程的方法可将全套抗体V区基因克隆出来，并在噬菌体表面表达、分泌、经筛选后获得特异性抗体，这种技术称为噬菌体抗体库技术 (phage display antibody library techniques)。所构建的抗体库称为全套抗体库。利用这一技术可以得到完全人源性的抗体，而且从理论上讲，这种抗题库中可以筛选出任何一种抗体。因此，它的成功研制代表着基因工程抗体的前沿，是生命科学研究的重大突破之一。 （三）噬菌体抗体库技术 原理：以噬菌体为载体，将抗体基因（Fab或scFv基因等）与噬菌体编码的外壳蛋白相连,导入宿主细胞，正确折叠后被包装与噬菌体尾部，随噬菌体表达，并释放出带有抗体的噬菌体。这种抗体可以特异性识别抗原，又能感染宿主进行再寄生。此技术的产生终于使人们有可能脱离体内系统，在体外制备特异性抗体。 噬菌体抗体库的构建 该项技术的优点: 将抗体的基因型和表型紧密联系起来; 可绕过杂交瘤技术，不需要复杂的基因工程技术; 抗体基因筛选的范围广; 技术稳定、可靠、生产周期短;可规模化生产; 适用范围广，既可用于抗体制备，也适用于其它蛋白如激素、酶、随机多肽等的生产。 一.在新型疫苗研制方面的应用 有报道表明，将白色念珠菌特异表位基因插入到修饰后的质粒载体中，制备了杂合噬菌体。利用纯化的该表位抗原PA免疫小鼠，结果表明：免疫后小鼠脾淋巴细胞在有、无佐剂的情况下均有明显增殖，未见明显的毒副作用。此法提示：用噬菌体展示某螳特异性抗原，可获得低价高效的T程疫苗。噬菌体展示技术作为一种新型技术，将成为有效的可以用来表达候选疫苗表位的工具。 噬菌体抗体库技术的临床应用 二、在临床检验方面的应用 目前，临床所用的体外诊断试剂盒的抗体基本上都来源于动物。相比之下用基因工程方法制备的人源单链抗体，不仅可以避免动物源性抗体非特异结合导致的本底高、血液动力学指标不稳定等缺点；且组织穿透力强，显像效果明显优于动物源性抗体，酶标的人单链抗体也在ELISA等检测中显示了令人满意的结果。 三.在自身免疫疾病中的应用 许多自身免疫疾病的发生，是由于机体产生的高亲和力自身抗体借助自身抗体依赖性细胞毒性（ADCC)作用或激活补体系统等机制引起组织病变，如重症肌无力、乔本氏甲状腺炎等。研究这些自身抗体的分布、基因构建、遗传规律、产生机制以及相应自身抗原的性质，将有助于人类对自身免疫疾病的认识。目前用于研究自身抗体的方法有杂交瘤技术和噬菌体抗体库技术。相比之下，噬菌体抗体库技术具有容易操作、可以大量制备和抗体人源化等优点。目前发现的lgG类自身抗体有64株，其中有49株是通过噬菌体抗体库技术得到的嘲。可以预见，利用噬菌体抗体，将来有可能弄清自身抗体的作用