人外周血线粒体dna4977bp缺失离与电离辐射相关性分析-放射医学专业毕业论文.pdf.docx

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或 撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材 料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明 并表示谢意。 学雠文储签移S’彭、签字嗍渺年罗月％日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 j壁塞垫塑医堂瞳 有关保存、使用学位论文的 管理办法。有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论 文被查阅和借阅。本人授权j妾立坯塑匡堂暄可以将学位论文的全部或部分内容 编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学 位论文。 ·(必威体育官网网址的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：／搏芗， 名：缸珞 签字日期：宙嗍侣年j月础日 签字日期：o哪年莎月彩日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 电话： 通讯地址： 邮编： 中国医学科学院北京协和医学院(清华大学医学部)硕士研究生毕业论文中文摘要 中国医学科学院北京协和医学院(清华大学医学部)硕士研究生毕业论文 中文摘要 本研究包括两部分内容： 第一部分外周血线粒体DNA最佳提取方法探讨 目的探讨简便高效提取人外周血线粒体DNA(mtDNA)的方法。方法分别 用线粒体DNA提取试剂盒方法、某文献方法和高盐沉淀法提取外周血mtDNA，对 三种方法所提取到的mtDNA分别经紫外分光光度检测、琼脂糖凝胶电泳及PCR扩 增目的产物电泳分析。结果三种方法所提得mtDNA产量有明显差别，经紫外分光 光度检测可得，高盐沉淀法所得mtDNA产量最高，为9．5788±0．3852；文献方法 次之，为4．3786±0．1495；试剂盒方法产量最低，为0．7408±0．1801。对所得mtDNA 进行琼脂糖凝胶电泳，亦显示高盐沉淀法所得样品条带最亮。以mtDNA为模板进 行PCR扩增，均可得533bp大小的目的带，但试剂盒法条带较暗。结论高盐沉淀 法提取人外周血细胞中mtDNA的产量高，质量可控，用于PCR扩增所得产物稳定 可靠，与其他提取方法比较有较好的应用价值。 第二部分人外周血线粒体DNA4977bp缺失与电离辐射的剂 量．效应关系研究‘ 目的通过对电离辐射诱发的人外周血线粒体DNA(mtDNA)4977bp缺失片 断的克隆，探讨辐射诱导的mtDNA4977bp缺失与电离辐射的生物剂量．效应关系。 方法 选取年龄28岁的1名健康男性，近期无射线接触史， 收集外周血20 mL，EDTA(乙二胺四乙酸)抗凝，平均分成10份，2 mI_／份，用本 所提供的137铯照射源对外周血样品进行离体照射，吸收剂量率为0．79 Gy／min，照 射剂量分别为0．2、0．5、1．0、2．0、3．O、4．0、5．0、6．0、8．0、10．0 Gy。另取1位67 岁老年男性外周血2 mL作为阳性对照。血样照射后在37*(2培养箱中放置2 h后进 行线粒体DNA的提取。所得mtDNA产物用巢式PCR方法扩增mtDNA4977bp缺 失片断，同时扩增mtDNA序列中相对稳定区域的片断作为内参照，代表总mtDNA 的量。通过琼脂糖凝胶电泳分离目的片段，并经凝胶图像分析系统获得灰度值，得 出mtDNA4977bp缺失片断与代表总mtDNA的片段的 灰度比值。结果l、从外周血样品中萃取的白细胞mtDNA的质量较高。2、电离辐 射诱发的人外周血线粒体DNA(mtDNA)4977bp缺失片断的大小与理论预期值 大小基本一致，在未照射的mtDNA中未能扩增出特异的PCR产物。3用巢式PCR 方法扩增得到的mtDNA4977bp缺失目的片断，通过对琼脂糖凝胶电泳图像和灰度 值的比较，得出照射剂量在O．2～3．OGy之间时，坎度比值基本呈增加趋势；而剂量 在4．0～10．0Gy之间时，比值变化较大且无规律性。结论1、通过在mtDNA4977bp 中国医学科学院北京协和医学院(清华大学医学部)硕士研究生毕业论文缺失片断两侧设计引物，用巢式PCR方法扩增得到了电离辐射诱发的跨4977bp缺 中国医学科学院北京协和医学院(清华大学医学部)硕士研究生毕业论文 缺失片断两侧设计引物，用巢式PCR方法扩增得到了电离辐射诱发的跨4977bp缺 失的目的DNA片断。2、初步建立了检测mtDNA4977bp缺失片断的半定量PCR分 析方法。在相对较低剂量(0．2—3．OGy)．照射时，mtDNA的4977bp缺失的量与受照 剂量呈一定相关性，当照射剂量大于4Gy时，这种剂量效应关系较不稳定。表明 mtDNA4977bp缺失片断的半定量PCR分