人肠道菌群体外模型及潜在应用研究-上内科学（消化系病）专业毕业论文.docx

万方数据 万方数据 解放军医学院硕士学位论文致谢 解放军医学院硕士学位论文 致谢 65 解放军医学院硕士学位论文 英文缩略词表 缩略词 英文全称 中文名称 FMT fecal microbiota transplantation 粪微生态移植 CDI Clostridium difficile infection 艰难梭菌感染 GC gωchromatography 气相色谱 HPLC high performance Iiquid chromatography 高效液相色谱 SCFA short chain fatty acid 短链脂肪酸 DNA rRNA deoxyribonucleic acid ribosome ribonucIeic acid 脱氧核糖核酸 核糖体核糖核酸 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链反应 VFA volatile fatty acid 挥发性脂肪酸 DGGE denaturing gradient geI electrophoresis 变性梯度凝胶电泳 OTU operational taxonomic 山山 操作分类单位 IBD inflammatory bowel disease 炎症性肠病 UC ulcerative colitis 溃药性结肠炎 DSS dextran sulfate sodium 葡聚糖硫酸纳 DAI disease activity index 疾病活动指数 HE hematoxylin-eosin 苏木精-伊红 解放军医学院硕士学位论文作者：范彬 解放军医学院硕士学位论文 作者：范彬 学科专业：内科学(消化系病) 导师：杨云生教授 人肠道菌群体外模型及潜在应用研究 中文摘要 目的：建立人肠道菌群体外静置培养模型和连续发酵模型，研究其潜在的应用价 值。方法：①建立人肠道菌群体外静置培养模型，将自动酿酒综合症病人1例和 健康志愿者2例的粪便分别接种于碳源为葡萄糖、淀粉、糊精和没有碳源的Ⅵ培 养基中发酵培养，利用气相色谱检测8h、16h、24h和48h时培养基内酒精浓度。 将病人粪便分别接种于含有利福昔明、甲硝唑、左氧氟沙星、亚胺培南的抗生素 培养基发酵培养，用高效液相色谱检测Ⅵ．A含量，沉淀进行细菌DNA提取和 16SrRNA基因高通量测序。②建立人肠道茵群体外连续发酵模型，取6个正常人 (TXz、FB、SQS、LW、WYS、CXX)的粪便样品，利用以淀粉为碳源的培养基 (Ⅵ)和以淀粉+多糖为碳源的培养基(XP)连续培养，7d后取样，上清检测SCFA， 沉淀用于细菌DNA提取和PCR．DGGE。粪便样品和发酵第13天样品的DNA做 高通量测序。同样方法，用单糖培养基(MD．1、MD．2)和改良Ⅵ培养基(Ⅵ一l、 vI．2、vL)对Lw进行模拟发酵。③建立渍疡性结肠炎小鼠模型，将C57BL／6小 鼠随机分为6组，A组是空白组，B组是模型组，CDEF组是实验组。A组给予无 菌水，BCDEF组给予2％DSS自由饮用6天造模。第7、9、11天，A组和B组 给予PBS灌胃，C组给予l％TXZ原始粪菌液，D组给予1％WYS原始粪菌液，E 组给予TXZ冻干发酵产物，F组给予WYS冻干发酵产物灌胃(0．1 IIⅣ10 g体重)。 每天记录小鼠存活数量和生存状态至第13天。结果：①通过静止模型研究证明自 动酿酒综合征病人粪便菌群体外发酵产生高浓度的酒精。和正常人粪便菌群相比 较，病人粪便接种在葡萄糖培养基中产生高含量的酒精(PO．05)。同时病人粪便 菌群在葡萄糖中产生的酒精含量比在淀粉、糊精的培养基中高(P0．05)。用含有 利福昔明、甲硝唑、左氧氟沙星的培养基培养病人肠道菌群仍可以产生酒精，但 在亚胺培南培养基中酒精产量几乎为零。16s涨测序证明在含有亚胺培南培养 解放军医学院硕士学位论文基葭酵启ESchenchi口．shigelt口、P吖口s锨e陀跳、讫讲0nelt口数i呗显减少．显示选些 解放军医学院硕士学位论文 基葭酵启ESchenchi口．shigelt口、P吖口s锨e陀跳、讫讲0nelt口数i呗显减少．显示选些 细菌可能参与了体内酒精的产生。②在体外连续发酵系统模拟人肠道茵群研究中 共完成6个人的肠道菌群体外模拟试验，比较了两种发酵培养基Ⅵ和XP体外模 拟效果。发酵罐平衡8天后DGGE图条带数目和亮度保持恒定，发酵罐开始进入 平衡状态。通过16s rRNA测序比较原始接种粪便样品的菌群结构和发酵产物的菌 群结构，发现所有样品含有80～160个OTU，发酵样品OTU数量均少于相对应的 粪便样品。同一个人的粪便样品在XP培养基内的OTU数量比VI多。而6个试验 对象的肠道茵群结构显示两种已经报告过的肠型，即TXZ、FB、SQS的粪便样品