人胆囊炎致病菌对豚鼠肠道屏障及其结构蛋白的影响-生物化学与分子生物学专业毕临业论文.docx

大连医科大学硕士学位论文目录 大连医科大学硕士学位论文 目录 摘要 1 目的 ．1 方法 ．2 结果 ．2 结论 ．3 Abstract 2I Objective ．．． ．． ．．．．． ．．。 ．．．．． ．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．。．．．．．．，． 5 Method ． ． ． ．． ． ．．．． ．． ．． ．． ．．．．．．．．．．．．．．．。．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5 Result ． ． ．． 6 Conclusion ．．7 丽青 ．8 材料和方法 9 1． 材料 9 1．1动物与菌种 ．9 1．2要主仪器 ．．9 1．3主要试剂 ．．9 1．4主要试剂的配置 ．9 2．实验方法 ．10 2．1动物模型的制备 10 2．2粪便样品DNA提取 10 2．3石蜡切片及HE染色 ．16 万方数据 大连医科大学硕士学位论文2．4免疫组化检测肠道紧密连接蛋白(Claudin 大连医科大学硕士学位论文 2．4免疫组化检测肠道紧密连接蛋白(Claudin 2和Occludin) 表达的变化 18 2．5结肠组织RNA的提取(Trizol研磨法) 19 2．6实时定量PCR(Real—time PCR)检测结肠分泌蛋白MUC 家族基因的表达 20 实验结果 ．．错误!未定义书签。 肠道菌群紊乱与肠道屏障功能的关系 33 1． 结肠黏膜屏障之粘蛋白 34 1．1粘蛋白MUCl 34 1．2粘蛋白MUCl3 35 1．3粘蛋白MUCl5 36 2． 结肠屏障之紧密连接蛋白 37 2．1紧密连接蛋白CLDN2 37 2．1跨膜蛋白Occ ludin 二 ．38 参考文献 ．39 剿扎 44 万方数据 大连医科大学硕士学位论文人胆囊炎致病菌对豚鼠肠道屏障及其结构蛋白的影响 大连医科大学硕士学位论文 人胆囊炎致病菌对豚鼠肠道屏障及其结构蛋白的影响 硕士生姓名：任晓萌 指导教师：辛毅教授 专业名称：生物化学与分子生物学 摘要 现代生活中，随着人类饮食结构和生活方式的改变，近年来胆囊炎的发病率 有增高的趋势。对于胆囊炎的发病机制有多种假说，细菌感染为其假说之一。本 课题组前期工作中，通过检测临床样本，发现胆囊炎患者的胆汁中有细菌存在， 并分离鉴定出一株感染性大肠杆菌Enteroinvasive Escherichia coli(EIEC)。 动物实验证实，口服该菌能够使豚鼠产生胆囊炎。这些证据提示该菌为人类胆囊 炎的致病菌。本课题旨在揭示该致病菌如何穿透肠道屏障入血的机制，为最终阐 明细菌性胆囊炎发病的分子机制提供理论依据。本课题模拟抗生素导致肠道屏障 受损状态，并通过PCR-变性梯度凝胶电泳(PCR—DGGE)技术来鉴定该状态的 存在，然后分组处理模式动物，一组用鼠李糖乳酸杆菌灌胃，作为阳性对照；另 一组用本实验室特有菌种E．coli 0124 K72灌胃。最后通过PCR—DGGE电泳结果 来观察肠道菌群变化，并通过HE染色切片来观察肠道形态学改变。研究表明， 肠道病原菌可以通过改变肠道紧密连接蛋白的屏障结构与功能，使其有利于细菌 的入侵和感染，从而具有操纵宿主的功能。本课题通过免疫组化来分析肠道紧密 连接蛋白的表达情况，并检测肝中，血中是否含有该致病菌，探究该致病菌是否 通过消耗肠道粘液为碳源，从而突破肠道屏障入血?还是该致病菌将肠道屏障破 坏，从而引起其他细菌大量入血入肝，最后入胆引起胆囊炎? 目的 本课题旨在揭示该致病菌如何穿透肠道屏障入血的机制，为最终阐明细菌性 胆囊炎发病的分子机制提供理论依据。通过模拟抗生素导致肠道屏障受损状态， 并由PCR．DGGE技术来鉴定该状态的存在，然后分组处理模式动物，一组用鼠 万方数据 大连医科大学硕士学位论文李糖乳酸杆菌灌胃，另一组用本实验室特有菌种E．coli 大连医科大学硕士学位论文 李糖乳酸杆菌灌胃，另一组用本实验室特有菌种E．coli 0124 K72灌胃。最后通 过PCR．DGGE电泳结果来观察肠道菌群变化，并通过HE染色切片来观察肠道 的形态学改变。通过免疫组化来分析肠道紧密连接蛋白的表达情况，并检测肝中， 血中是否含有该致病菌，探究该致病菌是否通过消耗肠道粘液为碳源，从而突破 肠道屏障入血?还是该致病菌将肠道屏障破坏，从而引起其他细菌大量入血入 肝，最后入胆引起胆囊炎? 方法 1、采用抗生素给动物灌胃，以提高感染性大肠杆菌的感染效果。抗生素左 氧氟沙星按照规定计量给两组豚鼠灌胃10天，分别在不同天数收集豚鼠粪便。 并用试剂盒对粪便总DNA进行提取。然后利用PCR—DGGE(Denaturing Gradient Gel Electr