人工血管携好腺病毒介导血管内皮生长因子基因对内皮细胞生长的影响-临床医学专业毕业论文.pdf.docx

缩写词表 缩写词表 (Abbreviation) 英文缩写 英文全称 中文全称 bFGF Basic fibroblast growth factor 碱性成纤维细胞生长 因子 DMEM Dulbecco’S Modified Eagle Media DMEM培养基 DMSO Dimethylsulphoxide 二甲基亚砜 EC Endothelial cell 内皮细胞 ECM Extracellular matrix 细胞外基质 EDTA EthyleneDiaminetetracetate 7,--胺四乙酸 EPC Endothelial progenitor cell 内皮祖细胞 ePTFE Expanded Polytetrafiuoroethylene膨体聚四氟乙烯 FBS Fetal Bovine Serum 胎牛血清 FN Fibronectin 纤维连接蛋白 HUVEC Human umbilical vein endothelial人脐静脉内皮细胞 cell IH Intimal Hyperplasia 内膜增生 MOI multiplicity of infection 感染复数 OD Optical density 吸光度 PBS Phosphate—buffered saline 磷酸盐缓冲液 rpm Round per minute 转{分 RT-PCR Reverse．transcription polymerase逆转录聚合酶链式反 ．3． chain chain reaction 应 SMC Smooth muscle cell 平滑肌细胞 TBE Tris—Borate．EDTA TBE电泳缓冲液 TGF-13 Transforming growth factor-beta 转换生长因子13 VEGF Vascular endothelial growth factor血管内皮生长因子 VEGFR Vascular endothelial growth factor血管内皮生长因子受 receptor 体 ．4． 中文摘要 中文摘要 背景： 小口径人工血管移植术后出现内膜增生和血栓形成，导致通畅率 不理想，主要是因为人工血管表面缺乏完整的内皮层。目前已经证实 通过人工血管表面快速内皮化可以减少再狭窄的发生。人工血管内皮 化的研究已经从种植内皮细胞进展到基因分子水平。血管内皮生长因 子(VEGF)是诱导血管内皮细胞生长作用最强、特异性最高的一种生 长因子。VEGF蛋白涂层和基因质粒转染都有其明显的缺陷。而腺病 毒作为载体转染取得了很好的效果。 目的： 观察人工血管携带腺病毒介导的VEGF基因转染内皮细胞的效 果、VEGF基因和蛋白的表达以及对内皮细胞生长的影响。 材料和方法： 1．ad5．EGFP转染EAhy926转染率的测定。 2．人工血管携带腺病毒在静水中的释放情况。 3．人工血管上内皮细胞的贴附情况。 4．ad5一VEGFl65．IRES．EGFP转染EAhy926，RT-PCR半定量检测 VEGF基因水平表达。 5．人工血管携带ad5．VEGFl 65．IRES—EGFP转染EAhy926，ELISA 法检测VEGF蛋白水平表达。 6．人工血管携带ad5一VEGFl65．IRES．EGFP转染EAhy926，MTT法 检测对内皮细胞生长的影响。 结果：1．ad5转染率随MOI的增加而增加，MOI 结果： 1．ad5转染率随MOI的增加而增加，MOI 200时达到87．3％。 2．人工血管上消化下来发荧光的细胞在最初的1h内，下降最为明 显。稀释液中基本没有发荧光的细胞。 3．电镜显示内皮细胞贴附在人工血管上。 4．ad5．VEGFl65转染组RT-PCR有VEGF基因的表达，第3天比第 1天表达强烈。对照组没有表达。 5．ad5．VEGFl65转染组上清液中有VEGF蛋白的表达，呈上升趋势 第5天达峰后开始下降。对照组没有表达。 6．ad5．VEGF 1 65转染组OD值呈快速上升趋势，对照组上升缓慢。 结论： 1．ad5转染EAhy926的最适MOI为200。 2．人工血管上携带的病毒静水中能在人工血管上保留lh左右，这是 一个逐渐释放的过程，而不是瞬时释放。 3．内皮细胞能够附着在人工血管上。 4．ad5．VEGFl65．IRES．EGFP能转染EAhy926，hVEGFl65基因水平 成功表达。 5．人工血管携带ad5．VEGFl65一IRES—EGFP能转染EAhy926， hVEGFl65蛋白水平成功表达 6．人工血管携带ad5．VEGFl 65．IRES—EGFP能促进内皮细胞的增殖。 关键词： 人工血管，血管内皮生长因子，内皮细胞，内皮化