人结直肠癌相关成纤维细胞和结肠正常成纤维细胞对结直肠癌细胞emt的影响及机制-病理学与病理生理学后专业毕业论文.docx

浙江大学硕士学位论文 中文摘要 人结直肠癌相关成纤维细胞和结肠正常成纤维细胞对 结直肠癌细胞EMT的影响及其机制 浙江大学医学院 病理学与病理生理学 2013级硕士研究生 聂倩倩 导 师 邓红副教授 中文摘要 结直肠癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，据世界癌症协会2015年的研究 表明，结直肠癌的发病率和死亡率仍然高居第三位。虽然针对结直肠癌的化学治 疗和靶向治疗已经取得了显著进展，但是仍有60％的手术后病人会发生原位复发 和远处转移。因此，只有彻底地弄清结直肠癌转移的机制，才能为结直肠癌的治 疗提供新方案。 肿瘤微环境不仅为肿瘤的生长提供了充足的营养，而且它可以通过一些信号 通路调控结直肠癌细胞发生转移。其中癌相关成纤维细胞(CAFs)是肿瘤微环境 的主要成分，它在结直肠癌转移过程中扮演了重要角色。相比于正常的成纤维细 胞(NFs)，CAFs中33个基因高甲基化，26个基因低甲基化，其表达更高水平的 FAP、0【一SMA和POSTN等等。目前CAFs到底是通过何种机制促进肿瘤细胞发生 转移尚不完全清楚。Wnt／[3．catenin信号通路的异常激活在结直肠癌的发生发展中 起了重要作用，那么CAFs是不是通过调控wnt／p．catenin信号通路发挥促肿瘤转 移的作用?既然NFs和CAFs细胞基因存在差异，那么NFs对肿瘤细胞 Wnt／p．catenin信号通路和其生物学行为又会产生何种影响?本研究将进行初步探 讨。 首先，我们采用组织块植入法，从人结直肠癌患者的肿瘤组织中分离纯化 CAFs，从正常切缘处分离纯化NFs，借助Western Blot和免疫荧光方法进行鉴定。 其次，通过免疫荧光、Q．PCR和SA．p．gal染色方法检测细胞活化和衰老程度，结 TT 万方数据  浙江大学硕士学位论文 中文摘要 果表明CAFs的活化和衰老程度均要高于NFs。接下来，我们将CAFs与肿瘤细胞 共培养，发现肿瘤细胞迁移能力增强，上皮标记E-Cadherin下调，间质标记Vimentin 和Fibronectin上调，即促进肿瘤细胞发生上皮间质转化(EMT·)；同时Wnt／p—catenin 信号通路相关因子S552和DVL3的水平上调，表明肿瘤细胞Wnt／]3一catenin信号通 路活化。用NFs上清条件培养结直肠癌细胞或NFs与肿瘤细胞共培养，肿瘤细胞 迁移和侵袭能力下降，E．Cadherin上调，N。Cadherin下调，即NFs抑制肿瘤细胞 发生EMT；同时writ／13．catenin信号通路相关因子13-catenin和DVL2的表达水平下 调，Wnt／13．catenin信号受抑制。进一步研究发现，NFs促进肿瘤细胞Wnt5a表达， 同时Wnt／Ca2+通路活化。 通过上述实验，我们得到以下结论： 1．人结直肠癌相关成纤维细胞活化和衰老程度高于结肠正常成纤维细胞； 2．人结直肠癌相关成纤维细胞促进结直肠癌细胞EMT、迁移和Wnt／13一catenin 信号通路活化； 3．人结肠正常成纤维细胞抑制结直肠癌细胞EMT、迁移和侵袭能力以及 Wnt／p．catenin信号通路活化，促进肿瘤细胞增殖，与Wnt5a高表达相关； 4．人结肠正常成纤维细胞诱导肿瘤细胞Wnt／Ca2+信号通路激活可能与Wnt5a 高表达有关。 关键词：结直肠癌；肿瘤一问质相互作用；癌相关成纤维细胞；成纤维细胞； Wnt／13．catenin信号；EMT；原代细胞培养 III 万方数据  浙江大学硕士学位论文 Abstract The effects of human colorectal cancer associated fibroblasts and normal colon fibroblasts on CRC cells’ EMT and its mechanism School of Medicine Zhej iang University Pathology and Pathophysiology Candidate for Master’S degree Qianqian Nie Supervisor Associate Prof．Hong Deng Abstract Colorectal cancer is one of the most common malignant tumors worldwide．Report bv me American Cancer Society in 20 1 5 shows that the morbidity and mortality of colorectal canc