人脐带行mscs移植对不可逆性梗阻性肾损伤模型大鼠治疗作用的研究-外科学专业毕业论文.pdf.docx

河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则，承担相应法律责任。 ：≯，：j；一t、． √1． 研究嵫：徘翩獐瀚案院譬蠖≥ ·、、?’，，／麓，矽哆箩。瀣月给日 0·√j∥j∥。 。“? 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 研究生签名： 导师擗鳓 加眵年弓归勉日 万方数据 目 目 录 中文摘要 ．1 英文摘要 ．4 英文缩写 ．8 研究论文人脐带MSCs移植对不可逆性梗阻性肾损伤模型大鼠治疗 作用的研究 前言日U舌 ．9 材料与方法 ．9 结果 ．1 6 附图 19 附表 28 讨{仑 ．3 1 结论 ．36 参考文献 37 综述MSCs对肾脏缺血再灌注损伤改善作用的研究进展 41 致谢 ．．52 个人简历 53 万方数据 中文摘要人脐带MSCs移植对不可逆性梗阻性肾损伤模型大鼠治疗作用的 中文摘要 人脐带MSCs移植对不可逆性梗阻性肾损伤模型大鼠治疗作用的 研究 摘 要 目的：从形态学及细胞免疫表型两个方面评判组织块贴壁法分离人脐 带MSCs的可行性及生化功能的完好性，从生化指标(血胱抑素C、血肌 酐值水平)、肾组织切片HE染色以及肾组织中VEGF、CTGF两项纤维 化相关蛋白的表达水平三个不同角度研究人脐带MSCs移植对不可逆性 梗阻性肾损伤的治疗和改善作用，为人脐带MSCs在梗阻性肾病的临床应 用提供进一步的实验和理论支撑。 方法： 1运用组织块贴壁法分离新鲜脐带的MSCs，在光镜下观察提取的人 脐带MSCs的细胞形态，运用流式细胞检测仪测定细胞的免疫表型。 2选取清洁级大鼠90只，随机分成模型组(单侧输尿管梗阻组，n-30， 大鼠行右侧输尿管结扎术，术后10天尾静脉注射生理盐水lml)，治疗 组(单侧输尿管梗阻+人脐带MSCs移植组，n=30，大鼠行右侧输尿管结 扎术，术后10天尾静脉注射含1x107MSCs的生理盐水lml)和对照组(假 手术组，n=30，分离右输尿管但不结扎输尿管，术后10天经尾静脉注生 理盐水lml)。三组大鼠分别于人脐带MSCs移植后1周、2周、4周共3 个时间点各取10只，抽血后处死取肾标本，行血胱抑素C水平、血肌酐 值的测定，肾组织切片HE染色的观察以及肾组织中VEGF、CTGF两项 纤维化相关分子在Western Blot检测中的表达水平的研究。 3实验所得数据用SPSS Statistics 19软件进行统计学处理，其中计量 资料以均数±标准差(夏±s)表示。检验标准为P=0．05。 结果： 1组织块贴壁法提取的人脐带MSCs，在显微镜下可观察到与成纤维 细胞形态相似的细胞。流式细胞检测示分离细胞表达CD90、CD73、CDl05 而不表达CDl9、CD34、CD45、CDl 16及mA—DR，其免疫表型符合人 间充质干细胞特征。 2在人脐带MSCs移植后不同时间点，模型组和治疗组大鼠同组间测 万方数据 中文摘要得的血肌酐值和血胱抑素C水平均有显著差异(尸O．05)，而在同一时 中文摘要 得的血肌酐值和血胱抑素C水平均有显著差异(尸O．05)，而在同一时 间点三组间的这两项指标亦有明显的差异(PO．05)。 3在人脐带MSCs移植后不同时间点，治疗组与模型组的肾组织病理 改变均表现为明显的肾小管空泡样扩张、炎性细胞浸润和间质纤维化改 变。组织病理学评分方面，模型组在移植后早期相对较轻，而2W后则持 续恶化(尸O．05)。此外，治疗组病理损伤严重程度明显较同一时间点的 模型组轻，但是在2W后也出现恶化趋势(尸O．05)。 4模型组VEGF蛋白表达水平随时间进展呈先增加后减少趋势，且 在人脐带MSCs移植后三个时间点的表达水平均较对照组强(PO．05)， 治疗组在移植后1W时VEGF蛋白表达水平较对照组明显增强，在2W时 到达顶峰，之后再度出现下降且在4W时弱于同组1W时表达量(氏O．05)。 5对照组CTGF蛋白表达水平最弱(PO．05)，模型组与治疗组均在 移植后1W时的表达量最高，往后随时间进展呈递减趋势，至移植后4W 达最低水平(PO．05)，但无论在移植后哪个时间点，治疗组CTGF蛋白 表达水平始终较模型组弱(尸O．05)。 结论