病理学常用技术原理及应用.pptVIP

病理学 病理学常用技术的原理及应用 石英爱 吉林大学白求恩医学院病理学系 提要 大体、组织和细胞病理学技术 组织化学与免疫组织（细胞）化学技术 电子显微镜技术 显微切割技术 激光扫描共聚焦显微技术 核酸原位杂交技术 原位多聚酶链式反应技术 流式细胞术 图像采集和分析技术 比较基因组杂交技术 生物芯片技术 生物信息学技术 大体观察 组织病理学观察 细胞病理学观察 大体、组织和细胞病理学技术 组织化学( Histochemistry) 免疫组织化学与免疫细胞化学 ( Immunohistochemistry, IHC and Immunocytochemistry, ICC) 组织化学与免疫组织（细胞）化学技术 免疫组织化学染色阳性信号定位 A 细胞质内弥漫阳性（细胞角蛋白）；B 细胞核阳性（雌激素受体）；C 细胞膜阳性（B细胞分化抗原CD20）；D 细胞膜和细胞质内点状阳性（CD30） 电子显微镜技术 肿瘤组织微血管形态的扫描电镜 通过又电子束和电子透镜组合成的电子光学系统的多极放大后，可以将微小物体放大成像，极大地提高分辨率 电镜技术使病理学对疾病的认识从组织、细胞水平深入到细胞内超微结构水平，观察到了细胞膜、细胞器和细胞核的细微结构及其病理变化 显微切割技术 冷冻切片的激光显微切割 是20世纪90年代初发展起来的一门新技术，能够从组织切片或细胞涂片上的任一区域切割下几百个、几十个同类细胞，甚至单个细胞，再进行如PCR、PCR-SSCP及比较基因组杂交等有关的分子水平的研究 激光扫描共聚焦显微技术 胶质瘤干细胞的分布和培养 激光共聚焦显微镜（Laser scanning confocal microscope, LSCM）是将光学显微镜、激光扫描技术和计算机图像处理技术相结合而形成的高技术设备 LSCM的主要功能 LSCM对样本的要求及其局限性 探针的选择和标记 原位杂交（In situ hybridization, ISH）的主要程序 荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization, FISH） ISH技术的应用 核酸原位杂交技术 原位杂交检测人类乳头状瘤病毒 染色体的荧光原位杂交 原位PCR技术方法 原位PCR技术的应用及存在的问题 原位多聚酶链式反应技术 原位PCR（in situ PCR）技术是将PCR的高效扩增与原位杂交的细胞及组织学定位相结合，在冷冻切片或石蜡包埋组织切片、细胞涂片或培养细胞爬片上检测和定位核酸的技术 特异性不高，尤其是假阳性问题 技术操作复杂，影响因素太多 需要特殊的设备，如原位PCR仪，价格昂贵 流式细胞术（Flow cytomerty， FCM）是利用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分析和分选的技术 流式细胞术 流式细胞术进行细胞分选 病理图像采集 病理图像分析 图像采集和分析技术 数字切片制作的原理 数字切片的优点与应用 比较基因组杂交技术 比较基因组杂交(Comparative genomic hybridization ， CGH) 它通过单一的一次杂交可对某一肿瘤全基因组的染色体拷贝数量的变化进行检查 比较基因组杂交(CGH) 基因芯片（Gene chip） 蛋白质芯片(Protein chip) 组织芯片(Tissue chip) 生物芯片技术 组织芯片 表达谱基因芯片 生物信息学(Bioinformatics)是一门研究生物系统中信息现象的新兴的交叉学科，涉及生物学、数学、物理学、计算机科学和信息科学等多个领域 生物信息学技术 生物分子信息处理流程 小结 大体、组织和细胞病理学观察方法 免疫组织化学的染色方法和结果质量控制 原位杂交技术、流式细胞术和激光共聚焦显微镜的应用 数字切片的优点与应用