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第七章 化学毒物的生殖毒性 生殖过程一般是指从配子形成直到胎儿娩出的过程。广义上,还包括新生儿期、哺乳期、直到性成熟的整个过程。 第一节 雄性生殖毒性 二、常见的雄性生殖毒物 棉酚; CS2、SO2; 铅、镉、汞、锰等; 甲胺磷、对硫磷、DDT、林丹等农药。 三、雄性生殖毒性的检测方法 (一)精子生成分析 1. 精子计数 2. 精子形态观察 3. 精子状态分析 (二)精子穿透试验 检测精子在体外能否成功穿透去透明带的金黄地鼠卵子而受精的试验。 三、雄性生殖毒性的检测方法 (三)睾丸中标志酶活性的测定 指标:乳酸脱氢酶x、山梨醇脱氢酶、6-磷酸葡萄糖 脱氢酶; 意义:是外源化学物对睾丸损伤的早期指标。 (四)体外试验 测定内容: 支持细胞中乳酸含量和乳酸脱氢酶活性的变化; 间质细胞分泌的雄激素含量; 支持细胞和间质细胞的数目和形态学变化。 三、雄性生殖毒性的检测方法 (五)雄性激素检测 指标:FSG、LH、雄激素的含量。 (六)显性致死试验 方法:给予雄性动物某种受试物,然后将其与未经染毒的雌性动物交配,观察胚胎早期死亡情况,以评价受试物是否对雄性动物的生殖功能有损伤的试验。 三、雄性生殖毒性的检测方法 (七)雄性生殖细胞的遗传毒性试验 ——单细胞凝胶电泳试验(彗星试验) 三、雄性生殖毒性的检测方法 (八)病理学检查 1. 大体检查 睾丸、附睾、前列腺及精囊的重量和形态; 2. 病理组织学检查。 第二节 雌性生殖毒性 一、 雌性生殖细胞的发生过程 二、常见的雌性生殖毒物 镉; CS2; 双环氧-4-乙烯环己烯、多氯联苯; 苯及其同系物; 林丹、开篷等有机氯农药。 三、雌性生殖毒性的检测方法 第三节 致畸试验 胚胎毒性作用:外源化学物对母体子宫内发育的胚胎或胎儿产生的毒性作用。 胚胎毒性的表现: 致畸作用: 致畸物:能引起妊娠的人或实验动物产生畸胎的外源化学物。 试验原理:一般通过观察妊娠母体在胎儿器官形成期接触受试物后胚胎及胎儿的发育状况来评价某种外源化学物有无致畸作用。 动物致畸试验设计: 1. 动物选择 遵循动物选择的一般原则; 妊娠期短而且一致; 产仔数多; 胎盘结构与人类接近; 自发畸形率低; 选用啮齿类和非啮齿类两种实验动物。 动物致畸试验设计: 2. 动物交配处理 将雌雄动物同笼交配,然后将怀孕的母体按随机分配原则分组。 3. 剂量分组 动物致畸试验设计: 4. 动物染毒 雌鼠妊娠的第7~15天染毒,常用灌胃方式。 5. 动物剖解 应在预期分娩前1~2天处死母鼠,暴露子宫和卵巢,进行胎仔检查。 6. 胎仔检查 外观畸形、内脏畸形、骨骼畸形。 7. 结果判定 7. 结果判定 细胞在体内或体外试验中与受试物接触,DNA链可能会发生断裂。将细胞制成单细胞混悬液,在载玻片上制备加有受检细胞混悬液的凝胶,在碱性条件下使细胞裂解,解旋DNA后进行电泳。带负电的DNA断裂端由阴极向阳极迁移。DNA经EB染色后在荧光显微镜下可观察到DNA受损的细胞核拖一条尾巴,呈彗星状;如DNA无损伤则见圆形的核。 通过测定彗星状细胞的数目、比例,以及彗星尾部的长度,即可以了解外源化学物对雄性生殖细胞DNA的损伤作用。 彗星试验属于一种雄性生殖细胞的遗传毒性试验。 解剖观察是生殖毒性病理检验的主要环节,对以后的光镜或电镜检查结果的可靠性以及结论的正确性都有很大的影响,必须认真做好大体剖解的操作、检视和记录,正确取材,选择合适的固定液保存病理检验材料,为病理检验的正确性提供前提条件。 病理学检查具有结果直观、结论可靠等优点。 大体解剖后,可以选择合适病料,进行光镜,以及电镜的观察,以研究其细胞、细胞器水平的病理变化。 1. HE染色,200倍光镜下观察的结果。 1. 了解外源化学物的生殖毒性作用,一方面应对其危害引起重视,尽量去消除和避免。(例如,引导农民正确使用农药,避免过量使用;加强粮食产品的农药残留检测;使用洗洁精清洗瓜果等)。但另一方面,也不能夸大外源化学物的毒性作用,甚至把所有的生殖功能障碍都归罪于它们。也就是不能忽视我们自身的因素,即健康的精神心理状态,和完备的生殖健康知识,只有三个条件兼备,才能保障我们的生殖健康,拥有健康的下一代。 重金属、大气污染物、工业污染物、工业原料、农药。 初级卵母细胞具有不可再生性。 繁殖试验目的在于了解外源化学物对机体整个生殖过程以及对子代是否产生毒性作用。通过繁殖试验即可了解外源化学物对动物性功能、交配行为、受精能力、分娩、授乳等过程的影响。(一代试验在动物出生或断乳时全部处死,仅能观察对繁殖/生殖过程的影响,而对子代的发育情况难以反映。) 二代繁殖试验:试验动物按设计剂量先给予受试物90d,性成熟后即可按常规方式交配,观察毒
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