常用生物化学检验技术一.ppt

* （三）生物电极 有酶电极或生物组织电极等。将生物化学与电化学结合而研制的电极。 酶电极：覆盖于电极表面酶活性物质(起催化作用)与待测物反应生成可被电极响应的物质，如 脲的测定 氨基酸测定 * 上述反应产生的NH4+可由铵离子电极测定。 生物组织电极：由于生物组织中存在某种酶，因此可将一些生物组织紧贴于电极上，构成同酶电极类似的电极。 * 四、分析方法 （一） 标准曲线法 配制一系列已知活（浓）度的欲测离子的标准溶液，逐一插入离子选择性电极和参比电极，测出它们相应的E值，以E对C作图得标准曲线。在同样条件下测出未知溶液的E值，即可从标准曲线上查出对应的欲测溶液的离子活（浓）度。 * （二） 标准加入法 当待测溶液的成份比较复杂，离子强度比较大时，难以配制与待测溶液组成相近的标液，此时，采用标准加入法较适宜。 * （三）、仪器直读法 该法是能在离子计上直接读出被测离子的浓度，这种仪器称为专用离子计。例如：PH计、氟离子计等。 * 五、电解质分析法在临床检验中的应用 （一） 单一型电解质分析仪 * 四、电解质分析法在临床检验中的应用 （二） 组合型电解质分析仪 * 四、电解质分析法在临床检验中的应用 （三） 全自动生化分析仪 * 熟悉分光光度计的操作方法。了解其它光谱分析技术如火焰光度法、原子吸收分光光度法和荧光光度法的基本原理 * 根据物质对光谱响应特征的不同，可把光谱检验技术分为发射光谱分析技术、吸收光谱分析技术和散射光谱分析技术三大类。 在临床生物化学检验中，光谱分析是一类十分重要的技术，应用极为广泛。它既可以研究物质的结构分析，也可以对特定物质进行定性或定量的分析。 * B. 吸光度的校正 铬酸钾的标准液可用于校正分光光度计的吸光度。在25℃，将4mg铬酸钾溶于100ml的0.05mol/L KOH中，放入比色池中，在不同波长下测定吸光度值，与己知的标准吸光度校正表进行比较，可检测仪器吸光度的准确度。 * 使用图示 1.开启电源，指示灯亮，仪器预热10分钟，选择开关置于“T” 。 2.打开试样室盖（光门自动关闭），调节“0%T”旋钮，使数字显示为“00.0”。 * 3.将装有溶液的比色皿放置比色架中。 4.旋动波长手轮，把测试所需的波长调节至刻度线处。 * 5.盖上样品室盖，将参比溶液比色皿置于光路，调节透过率“100%T”旋钮，使数字显示为“100.0T” （如果显示不到100%T，则可适当增加灵敏度的档数，同时应重复“2”，调整仪器的“00.0”）。 * 6.将参比溶液比色皿置于光路中，将选择开关置于A，旋动吸光度调零旋钮，使得数字显示为.000，然后移入被测溶液，显示值即为试样的吸光度A值。 * 8．全部测定结束后，取出比色皿(洗净)，关闭开关. * 三、分光光度技术的定性和定量方法 （一）分光光度技术的定性方法 定性依据： 最大吸收波长λmax和摩尔吸光系数ε 2.摩尔吸光系数ε方法 1.最大吸收波长λmax方法 * （二）分光光度技术的定量方法 1.标准曲线法 将一系列浓度不同的标准溶液按照一定操作过程显色后，分别测吸光度(A)，以A为纵坐标，浓度为横坐标制标准曲线(至少要5点)。在相同条件下处理待测物质并测定其吸光度，即可从标准曲线找出相对应的浓度 方法： * AX CX A（吸光度） C（浓度） * 制作和应用标准曲线时应注意下面几点： （1）测定条件发生变化时（如更换标准品和试剂等），应 重新绘制。 （2）标准品应有高的纯度，标准液的配制应准确。 （3）当待测液吸光度超过线性范围时，应将标本稀释后再 测定。 （4）标本测定的条件应和标准曲线制作时的条件完全一致。 * 2．比较法 CX=(AX×Cs)/As 己知浓度的标准品和标本作同样处理，使用相同的空白， 同时测定标准管和标本的吸光度，根据测定的吸光度及标准 品浓度，可直接计算出标本的浓度，计算公式为： 其中Cx和Ax为标本管浓度和吸光度，Cs和As分别为标准 管浓度和吸光度。用标准品法定量时，标准品的浓度应尽量 和标本管浓度相近。 * 3．其它分析方法 包括差示法、多组份混合物分析和利用摩尔吸光系数分析等方法。 * 四、其它光谱分析技术 （一）火焰光度法 （二）原子吸收分光光度法 （三）荧光光度分析法 1．基本原理 2．组成 1．基本原理 2．组成 3．原子吸收分光光度法的特点 3．荧光光度定量分析法 4 ．荧光光度分析技术的应用 1．基本原理 2．影响荧光强度的因素 * 火焰光度法——等离子体发射光谱法 * 原子吸收分光光