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实用标准文案 精彩文档 提取大豆异黄酮糖苷和苷元并比较其免疫能力的强弱 实验设计 南方医科大学 第二临床医学院 10级临床医学院（妇幼保健）石惠卿 10级临床医学院（妇幼保健）罗玉云 10级临床医学院（妇幼保健）林冬华 10级临床医学院（妇幼保健）彭书杰 10级临床医学院（妇幼保健）刘颖慧 摘要 大豆异黄酮是一种生理活性物质，更是人体生理生化中不可缺少的成分，它对调节人体新陈代谢，预防中老年疾病有一定的意义。 研究和开发含有大豆异黄酮的各种新产品，不仅可以提高大豆的附加值，而且可创造出乐观的经济效益，经调查，市场对大豆异黄酮的年需求量在1500吨，而目前的年产量为500吨。因此大豆异黄酮的研究与开发就有很大的市场潜力。本次试验着重于异黄酮糖苷和苷元的提取，及其在免疫功能上的差异的研究。 关键词：大豆，异黄酮糖苷，异黄酮苷元，免疫 目 录 1.前言………………………………………………………………………………2 2.实验目的…………………………………………………………………………3 3.实验原理…………………………………………………………………………4 4.实验器材与试剂…………………………………………………………………5 5.实验步骤…………………………………………………………………………6 6.结果预测及分析………………………………………………………………………8 7.可行性评估…………………………………………………………8 8.注意事项…………………………………………………………………………9 9.参考文献…………………………………………………………………………9 1.前言 大豆是豆科植物的成熟种子，大豆异黄酮是大豆生长过程中形成的一类次生代谢产物，其结构与雌激素相似，是一类植物雌激素。大豆异黄酮有很多方面的药理活性，包括抗癌预防和治疗心血管疾病，预防和治疗骨质疏松和更年期综合症以及免疫调节作用。经研究发现，大豆异黄酮主要在肠道被吸收，吸收率为10%~40%。目前对大豆异黄酮 功效 性质的研究报道很多，但关于大豆异黄酮糖苷和苷元免疫功能对比实验研究尚少，为明确大豆异黄酮糖苷及其苷元组分 的生理作用 ，本次实验对比研究大豆异黄酮糖苷和苷元对小鼠体液免疫功能的影响 。 2.实验目的 2.1从大豆中提取异黄酮糖苷及苷元 2.2对大豆异黄酮糖苷及苷元进行定性鉴定 2.3对大豆异黄酮糖苷及苷元进行定量鉴定 2.4比较大豆异黄酮糖苷和异黄酮苷元 对小鼠血液中溶血素含量的影响 2.5通过本实验，比较出异黄酮糖苷和异黄酮苷元免疫功能的大小，为进一步的研究提供参考。 3,实验原理: 3.1异黄酮糖苷及苷元的提取原理 异黄酮类化合物属于多酚类化合物，它的母体为3一苯基苯并毗哺酮.异黄酮类化合物常温下为固体，熔点在11℃以上，性质稳定，易于贮藏。易溶于有机溶剂如氯仿、二甲基甲酸胺、乙醇等，不溶于水、甲醇等极性溶剂。本次试验以大豆为原材料，制备异黄酮糖苷。 后用酸水解法 得异黄酮苷元。 3.2异黄酮糖苷及苷元的定性鉴定原理 异黄酮糖苷为含糖衍生物，所以可以发生molish反应，产生紫环。而异黄酮苷元为结合与糖的非糖部分，不会与molish反应。 3.3异黄酮糖苷及苷元对血液中溶血素的影响比较 异黄酮糖苷和异黄酮苷元 可促进小鼠分泌溶血素，以鸡红细胞悬液为免疫原进行免疫，鸡红细胞悬液可与小鼠体内的溶血素发生免疫反应，通过测定溶血素光密度值来推断糖苷和苷元的免疫功能强弱。 3.4小鼠粪便中糖苷和苷元含量的测定 通过测定小鼠粪便糖苷和苷元的含量，从而间接测出小鼠对糖苷和苷元的吸收多少来推断糖酐和甘愿的免疫功能强弱。 4实验器材与实剂 4.1实验器材 抽滤装置、索氏提取装置、烘箱、恒温水槽、旋转蒸发器、回流装置、分光光度计、电动搅拌器、温度计、小试管、试管夹、标签、锥形瓶、量筒、烧杯、蒸发皿、圆底烧瓶、石棉网、胶头滴管、铁架台、漏斗、玻璃棒、灌胃器、微量加量器、布氏漏斗、酒精灯、滤纸、棉花、棉签、高速冷冻离心机、制备型高效液相色谱分析仪、分析性高效液相色谱分析仪。 4．2实验材料及试剂 材料：豆粉200g,活体小鼠12只，80%乙醇溶液，1mol/L盐酸溶液，乙酸乙酯，molish试剂，浓硫酸、50mmol/L醋酸钠缓冲液—甲醇—乙腈（体积比为40:40:20）混合液、流动相II为50mmol/L醋酸钠缓冲液（pH5）—甲醇（体积比为80：20）混合液、甲醇—水（体积比为30:70）混合液、甲醇—体积分数为0.1%的乙酸水溶液（体积比为23:77）、5%生理盐水鸡红细胞悬液、生理盐水、补体溶液 4.3 5%生理盐水鸡红细胞悬液 配制方法：鸡血红细胞置于Alsever氏液中在4摄氏度下冰箱保存，临