pcr对检测方法分析性能评价2012.3.ppt

PCR检测系统分析性能验证 上海市临床检验中心 肖艳群 相关规定 医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的指南CNAS-GL xx 5.5.2) 实验室应在应用于医学检验之前验证所使用的检验方法和程序的分析性能.对于定量检测项目内容至少包括正确度、精密度、可报告(或线性)范围.对于定性检测项目内容应包括灵敏度、特异性或符合率及重复性 上海市医疗机构临床基因扩增检验技术审核办法 临床基因扩增检验实验室在技术审核前应完成拟开展检测项目方法学验证。方法学验证实验应包括但不限于：精密度、正确度、检测限、线性范围、可报告范围、特异性试验 什么情况下要做性能验证 开展新项目 更换检测系统:更换仪器或试剂 分析性能验证项目 对配套系统,一般验证以下指标 精密度 准确度 可报告范围 参考区间 对非配套系统除验证上述指标外 分析灵敏度 分析特异性 依据文件(CLSI 文件) EP5-A2:定量测量方法的精密度性能评价 EP6-A:定量测量方法的线性评价 EP7-A:临床化学的干扰实验 EP9-A2:用患者样本进行方法学比对及偏倚评估 EP12-A2:定性实验方法评价用户协议 EP15-A2: 用户对精密度和准确度核实试验 EP17-A: 检出限和定量检出限确定方案 C28-A2: 医学实验室参考区间的定义和确定 性能验证前的准备 应熟悉待验证的检测系统 应熟悉验证方案的步骤(PCR检测项目成本高、阳性标本来源困难,精密度和正确度验证可以采用EP15-A2 文件) 制定质量保证措施 确保足够的样本数量和覆盖较宽检测范围 确定比较方法 EP15-A2:精密度和准确度性能的用户验证 实验室验证方法的操作与厂家的申明一致 为验证重复性、实验室内精密度的申明提供方案和数据分析 其他的 CLSI 文件为厂家做出精密度(EP5-A2)和准确度(EP9-A2)的申明提供指南 精密度验证 重复性:指在相同条件 (时间、操作者、仪器)下获得的精密度,也称批内精密度 实验室内精密度:同一实验室内，使用相同的设备, 在不同时间内获得的精密度,也称总精密度.(不包括大的设备维护、仪器校准和更换试剂批号等) 实验要求 试剂:同一批号 实验样本 以前分析过的病人样本 其他已知值的物质 浓度要求: 医学决定水平 厂家说明书精密度指标所用浓度 内容 重复性 实验室内精密度 实验步骤 根据厂家申明的精密度比例关系可分为3种情况: 1)如果σ批内2/3 σ总:每天分析1批次,2个浓度,每个 浓度重复测定4次,连续5天. 2)如果σ批内2/3 σ总:每天分析1批次,2个浓度,每个浓度重复测定3次,连续3天. 3)如果σ批内与 σ总相对关系未知:每天分析1批次,2个浓度,每个浓度重复测定4次,连续5天. 每天做室内质控,如果失控,剔除数据,重新进行测定 实验数据的统计学处理:批内标准差、实验室内标准差 结果判断 重复性验证: 批内标准差厂家申明,验证通过 批内标准差厂家申明,则通过计算验证值进行差异的显著性检验, 批内标准差验证值验证通过 实验室内精密度验证: 实验室内标准差厂家申明,验证通过 实验室内标准差厂家申明,则通过计算验证值进行差异的显著性检验, 实验室内标准差验证值,验证通过 准确度与正确度、精密度的关系 正确度验证 比对方法:用临床病人样本进行方法学比对,类似EP9- A2文件 参考物质 两种方法间病人标本结果的比较 实验设计: 1)收集20份病人样本,其浓度分布整个线性范围,不使 用超出线性范围的标本 2)在3-4天时间内,每天用实验和比对方法测定5-7份样本 3)每天做室内质控,如果失控,剔除,问题纠正后重新测定该批标本 实验数据处理 计算每个标本两种方法间结果的差异 偏倚bi=实验方法结果i-比较方法结果i 偏倚%=100%(实验方法结果i-比较方法结果i)/比较方法结果I 画出每个标本两种方法结果的偏倚或百分比偏倚图,比较两种方法间在检测的浓度范围内标本结果差异是否一致 计算两种方法间的平均偏倚 计算偏倚或百分比偏倚的标准差 结果判断 如果偏倚厂家指标(实验室指标),验证通过 如果偏倚厂家指标(实验室指标),则通过计算验证值进行差异的显著性检验, 在验证限范围内,验证通过 选择厂家申明中使用