Lactobacilluscasei磷脂酶A2基因在.PDF

第 １２卷第４期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ１２ Ｎｏ４ ２０１４年７月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊｕｌ２０１４ － ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１４０４００７ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ磷脂酶Ａ 基因在 ２ 大肠杆菌中的重组表达 刘丹丹，张　 梁，顾正华，丁重阳，石贵阳 （江南大学 工业生物技术教育部重点实验室 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室，无锡 ２１４１２２） ＋ 摘　 要：以Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ染色体基因组为模板，ＰＣＲ扩增获得磷脂酶Ａ 基因ｐｌａ２，以ｐＥＴ ２８ａ（ ）为载体构建 ２ ＋ 重组表达质粒ｐＥＴ ２８ａ（ ） ｐｌａ２。 通过ＩＰＴＧ诱导实现磷脂酶Ａ 在Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＥ３ 中的重组表达。 对诱导条件初步 ２ 优化后，重组菌酶活最大可达２８Ｕ／ ｍＬ。 通过Ｎｉ 螯合柱对目的蛋白进行纯化，ＳＤＳ ＰＡＧＥ分析重组磷脂酶Ａ 相 ２ ４ × 对分子质量为１７ １０ 。 通过酶学性质分析，最适温度为３７ ℃，最适ｐＨ ８，比酶活为１１０ Ｕ／ ｍｇ。 关键词：大肠杆菌；干酪乳杆菌；磷脂酶Ａ ；重组表达 ２ － － － 中图分类号：Ｑ７８９　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１４）０４ ００３２ ０５ Ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ ｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ２ ＬＩＵ Ｄａｎｄａｎ，ＺＨＡＮＧ Ｌｉａｎｇ，ＧＵ Ｚｈｅｎｇｈｕａ，ＤＩＮＧＺｈｏｎｇｙａｎｇ，ＳＨＩ Ｇｕｉｙａｎｇ （Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｃｅｒｅａｌ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｋｅｙ Ｌａｂｏ