甘蓝多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白BoPGIP基因的克隆及序列.PDF

中国农学通报 2012,28(28): 128-133 Chinese Agricultural Science Bulletin 甘蓝多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白BoPGIP基因 的克隆及序列分析 张 弢 （青岛农业大学生命科学学院/ 山东省高校植物生物技术重点实验室，山东青岛266109 ） 摘 要：PGIP 是一种特异性结合和抑制真菌内切PG 活性的细胞壁结合蛋白，在植物分子抗病育种中占 有十分重要的地位。甘蓝PGIP 基因的克隆和序列分析，将为进一步通过转基因技术培育抗病甘蓝新品 种奠定基础。本研究通过同源序列克隆法，根据GenBank 已登录的青花菜BoPGIP 1(Accession: JF325875)基因全长序列设计基因特异性引物，利用PCR 扩增技术从甘蓝中克隆基因，利用生物信息学 的方法对其编码蛋白的结构和功能进行了预测。将获得的PGIP 基因命名为BoPGIP 。该基因DNA 全 长为1065 bp ，包含1 个内含子和2 个外显子。外显子全长975 bp ，编码342 个氨基酸，分子量为36.2 kD ， 等电点是6.26 。该基因属于PGIP 基因家族，具有典型的LRR 结构域；功能位点分析显示编码蛋白序列 中包括4 个N-糖基化位点(65~68 ，106~ 109，130~ 133，254~257) ，1 个蛋白激酶C 磷酸化位点(189~ 191) ，5 个酪蛋白激酶II 磷酸化位点(73~76 ，78~81，151~ 154，182~ 185，304~307)和4 个N- 豆蔻酰化位点(157~ 162，188~ 193，236~241 ，273~278) ；N 末端具有一明显跨膜区域和一个典型信号肽序列；二级结构中包含 31.79%helix ，13.89sheet 和54.32%loop ，二级结构以无规则卷曲为主。通过对所克隆的甘蓝BoPGIP 基 因分析可知，该基因属于PGIP 基因家族的新成员，基因的克隆及序列分析为进一步验证甘蓝BoPGIP的 功能奠定了基础。 关键词：甘蓝；BoPGIP ；克隆；序列分析 中图分类号：Q781 文献标志码：A 论文编号：2012-1700 CloningandSequenceAnalysisofaPolygalacturonaseInhibitingProteinBoPGIPGene inBrassicaoleraceaL. Zhang Tao (QingdaoAgriculturalUniversity,KeyLabofPlantBiotechnologyinUniversitiesofShandongProvince, Qingdao Shandong 266109) Abstract: PGIP is a cell wall binding protein specific binding and inhibiting activity of fungal endo-PG activity and occupies a very important position in plant molecular resistance breeding. Cloning and sequence analysis of PGIP gene in Brassica oleracea L. will lay the foundation for breeding resistant disease varieties through the transgenic technology. Therefore, in the paper, through the homologous sequence cloning method, a new