动物胚胎移植技术及体外受精.pptVIP

体外受精 获能 次级卵母细胞减数第二次分裂中期 1．卵母细胞的获得与体外成熟 1）卵细胞的采集方法 获得足够数量的卵母细胞是生产试管动物的前提 （1）从屠宰场家畜卵巢中采集 （2）从超数排卵的卵巢获得卵泡,借助腹腔镜，手术法取卵 （3）阴道超声波监视穿刺法直接从牛卵巢收集卵母细胞和内窥镜借助套筒穿刺阴道穹隆获得 2）卵母细胞的成熟 未成熟的卵母细胞的核在细胞中央，成熟过程中迁移到动物极质膜下，核变得膨大，改称发生泡，接着进行第一次成熟分裂，减数分裂的完成标志着卵母细胞核的成熟 （1） 细胞核成熟 （2） 细胞质的成熟 显著的蛋白质合成发生在生发泡破裂前后，这些新合成的蛋白质不仅与卵细胞自身成熟有关（激活成熟促进因子），而且与卵母细胞输精后的发育能力直接有关，所以细胞质成熟的质量如何直接影响到早期胚胎的发育能力 胞质成熟主要表现为细胞器变化和纺锤体的形成 卵母细胞成熟后期细胞器完成重新组装，如高尔基体消失，线粒体分布核的周围，胞质内有PAS阳性的囊膜和脂滴 （3）细胞膜和透明带的成熟 细胞膜稳定性发生改变，膜微绒毛发生重排，表现密集而有弯曲，并从透明带内退出或断裂 透明带外层呈网状，变软 2、体外获能 指精子在体外获得受精能力的过程 包括在体外环境中除去精浆和精子表面吸附的大分子物质，减少表面阴性电荷，提高膜流动性，增加精子呼吸率和加快运动幅度等一系列生理生化过程 精子体外获能是体外受精技术的关键环节，主要包括精子的洗涤和添加特定成分 Brackett（1982）以高离子强度液处理使精子获能 钙离子在精子获能时起关键作用，能较快的诱发精子超活化运动和顶体反应 氨基多糖（GAGs）是牛精子获能的主要物质，可促进对钙离子的吸收，诱发顶体反应。如肝素也可使精子获能，但同样是一个钙离子依赖的过程 血清白蛋白（BSA）也可诱发精子获能。可能作为Zn离子融合剂引起PLA2的表达，或者在获能中去除精子膜上的胆固醇 3、 体外受精 体外受精是以正常体内受精的研究为基础的，尽可能给精—卵提供一个适宜的共培养体系是研究体外受精的目的 受精成功的标志是看受精卵是否可发育至囊胚期阶段 多精子受精一直是体外受精的一个难点 4、受精卵的体外培养 受精卵要在体外条件下培养发育一段时间，再移植到受体子宫内，因此，“试管动物”实际上要在体外进行三个阶段的培养： 第一阶段是卵子成熟培养和精子获能培养 第二阶段是受精培养 第三阶段才是受精卵早期发育培养 5、存在的问题 体外受精的效率有待提高 体外培养体系有待进一步完善 基础理论研究有待加强 * * * 选择 供体母牛 受体母牛 ……同期发情处理…… 超数排卵 供体公牛 配种 冲卵 质量检查、培养 胚胎移植 妊娠检查 分娩（胚胎移植的犊牛） 胚胎移植的基本程序 8)胚胎移植的应用范围 在家畜改良方面的应用 在特定品种扩繁上的应用 在动物生物多样性上的应用 其它方面应用：转基因动物、性别控制、体外受精 在家畜改良方面的应用 人工授精技术可成几十到几百倍地提高了优秀种公畜的配种效能，但对优秀母畜来说，受其产仔数和世代间隔的限制，尤其是牛羊等繁殖力较低的畜种更是如此 通过超数排卵和胚胎移植技术（multiple ovulation and embryo transfer: MOET)牛羊的生长性状年遗传进展可比正常繁殖提高80%和70%；产奶性状提高33% 在特定品种扩繁上的应用 牛羊等低繁殖力家畜，从引进到形成一个纯种群体需要7-8个世代，15-20年，而采用MEOT法，一次就可获得一个纯种群体 80年代初，美、澳、新从欧洲引进的大型肉牛品种均采用胚胎移植技术扩繁 2000年前后，我国的波尔山羊也是采用胚胎移植进行扩繁的 在动物生物多样性上的应用 在保护动物遗传资源，提高家畜生产性能，挽救濒临灭绝的野生动物方面，胚胎移植技术越来越发挥出重要作用 冷冻能够很好地保存濒临灭绝动物的胚胎或生殖细胞，但该种动物雌性个体的减少，也是这种动物的胚胎或生殖细胞无法得到移植，科学家开始研究在该种动物的亚种或亲缘种中试验，并取得一些成功，如斑马胚胎移植给马，蒙古马胚胎移植给驴，白肢野牛移植给荷斯坦牛 其它方面应用 胚胎移植是克隆技术的必须过程 体外受精必须借助胚胎移植实现“试管婴儿的继续发育” 转基因及动物生物反应器的研究也必须借助胚胎移植 二、胚胎分割技术 1）概念 采用显微手术（机械方法）的方法将早期胚胎分割成2分胚，4分胚或8分胚，经体内或体外培养后植入受体，以得到同卵双胎或同卵多胎的技术 胚胎分割以增加优秀遗传性状的动物数量为主要目的，可提高胚胎移植技术的效率和效益 选择良好的桑椹胚或囊胚移入培养皿中，用分割针或分割刀片将其切开，吸出其中的半个胚