微生物实验指导书-..doc

PAGE PAGE 1 微生物学 实 验 指 导 书  目录 TOC \o 1-3 \h \z \u HYPERLINK \l _Toc369806895 实验一 玻璃器皿清洗、包扎与常用灭菌技术 PAGEREF _Toc369806895 \h 3 HYPERLINK \l _Toc369806901 实验二 培养基的配制 PAGEREF _Toc369806901 \h 8 HYPERLINK \l _Toc369806902 实验三 从土壤中分离微生物及纯化 PAGEREF _Toc369806902 \h 11 HYPERLINK \l _Toc369806903 实验四 微生物的接种技术 PAGEREF _Toc369806903 \h 14 HYPERLINK \l _Toc369806904 试验五 细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的形态观察 PAGEREF _Toc369806904 \h 17 HYPERLINK \l _Toc369806905 实验六 细菌的简单染色和革兰氏染色 PAGEREF _Toc369806905 \h 20 HYPERLINK \l _Toc369806906 实验七 大肠杆菌生长曲线的测定 PAGEREF _Toc369806906 \h 23 HYPERLINK \l _Toc369806907 实验八 实验室环境和人体表面微生物的检查 PAGEREF _Toc369806907 \h 25 HYPERLINK \l _Toc369806908 实验九 乳酸菌的检测 PAGEREF _Toc369806908 \h 28  实验一 玻璃器皿清洗、包扎与常用灭菌技术 【目的要求】 1. 学习并掌握棉塞制作的目的、原理及方法； 2. 学习并掌握玻璃器皿清洗及包扎方法； 3.掌握高压蒸汽灭菌的基本原理及操作方法。 4.了解其它常用消毒灭菌技术原理及技术 【基本原理】 棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染，二是保证通气良好。因此，棉塞质量的优劣对实验的结果有较大的影响。 微生物学实验所用的器皿，大多数要进行清洗、消毒、灭菌，才能用来培养微生物。玻璃器皿的包扎方法正确合理，在使用过程中才能有效防止杂菌的污染。玻璃器皿包扎好后，一般用高压蒸气灭菌法进行灭菌。 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到100℃以上的高温，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。此外，常见灭菌方法还有干热灭菌、灼烧灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等。对空间灭菌常使用甲醛加高锰酸钾熏蒸、喷洒消毒灭菌药剂等消毒灭菌方法。 【实验用品】 棉花，试管，培养皿，纱布，三角瓶，棉线，量筒，牛皮纸（或旧报纸），LDZX-50KBS立式高压蒸气灭菌锅，常用灭菌用具、药剂等等。 【方法步骤】 一、棉塞的制作 正确的棉塞要求形状，大小，松紧与试管口（或三角瓶口）完全适合，过紧妨碍空气流通，操作不便；过松则达不到滤菌的目的。制作过程见图1，包括取棉花、整理、折角、卷紧、成形、塞试管等步骤。塞上棉塞时，应使棉塞长度的1/3在试管口外，2/3在试管口内。 图1 棉塞制作过程 做棉塞的棉花要选纤维较长的，一般不用脱脂棉做棉塞，因为它容易吸水变湿，造成污染，而且价格昂贵。此外，在微生物实验和科研中，往往要用到通气塞，即用几层纱布（一般8层）相互重叠而成，或是在两层纱布间均匀铺一层棉花而成。这种通气塞通常加在装有液体培养基的三角烧瓶口上。经接种后，放在摇床上进行振荡培养，以获得良好的通气促使菌体的生长或发酵，通气塞的形状如图2。 A. 配制时纱布塞法；　B. 灭菌时包牛皮纸；　C. 培养时纱布翻出 图2通气塞 二、玻璃器皿的清洗 1. 不能用有腐蚀性的化学试剂，也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器皿；新的玻璃器皿应用2%的盐酸溶液浸泡数小时，用水充分洗干净。 2. 用过的器皿应立即洗涤。 3. 强酸、强碱、琼脂等能腐蚀、阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须倒在废液缸内。 4. 含有琼脂培养基的器皿可先将培养基刮去，或用水蒸煮，至培养基融化后倒出，然后再用洗洁精清洗。凡遇有传染性材料的器皿，应经高压蒸汽灭菌后再进行清洗。 5. 一般的器皿可以用去污粉、肥皂或洗洁精清洗，油脂很重的器皿应先将油脂擦去。沾有煤膏、焦油及树脂一类物质，可用浓硫酸或40%氢氧化钠或用洗液浸泡；沾有蜡或有油漆物，可加热使之熔融后揩去，或用有机溶剂（苯、二甲苯、汽油、丙酮等）揩去。 6. 载玻片或盖玻片，先擦去油