新型安全Barrett食管及食管腺癌动物模型建立.pptVIP

新型安全的Barrett食管及食管腺癌动物模型的建立 南京军区福州总医院 王 雯 林 晴 近年Barrett食管（BE）、食管腺癌（EA）发病率显著上升，成为研究热点 目前其发病机制尚不十分明确，也没有确实有效的方法来防治 有必要建立安全、有效、合理的动物模型进行系统研究 目前由反流引起BE、EA的动物模型多为在手术引起食管内胃十二指肠反流的基础上，加用特异性食管致癌剂(如亚硝胺类物质)的方法制作 致癌剂长期使用对研究者有害 国外初步研究表明，铁剂是一种肿瘤增效剂 本研究目的：用铁剂代替致癌剂，建立新型BE及EA动物模型，并研究食管病理改变 材料与方法 1、实验动物与分组 雄性SD大鼠150只，随机分成3组： 对照组15只 单纯铁剂组45只 单纯胃十二指肠食管反流组45只 反流加铁剂组45只 2、模型制作方法 1）术前处理 术前禁食24h，禁水12h。 2）手术方式 对照组及铁剂组行伪开腹术 反流组与反流铁剂组行食管十二指肠端侧吻合术 3）术后处理及标本采集： 术后观察大鼠饮食、活动情况，每周测定体重 铁剂组与反流铁剂组于术后2周开始腹腔内注射右旋糖苷铁（50mg/kg，每周2次，共22周） 术后8周每组各处死5只，其余大鼠于24周全部处死，取出食管进行研究 3、食管标本分析 大体形态观察 常规HE染色，光镜下组织学检查 结 果 1、大鼠模型生活情况 无反流组及铁剂组饮食、活动、体重基本正常 术后两反流组大鼠体重下降，2周后体重均渐上升，至19周左右两组体重逐渐下降 至24周，共死亡8只。存活率94.7％ 2、大体形态学观察结果 无反流组大鼠在整个实验过程中食管粘膜光滑。 1）术后8周 铁剂组仅见少数食管粘膜粗糙。 两反流组食管壁增厚，食管不规则增粗，食管下段出现不同程度糜烂、溃疡、增生。 反流铁剂组病变的累及范围及严重程度较反流组重，反流组又较铁剂组重。 2）术后24周 各实验组食管病变较8周时加重 铁剂组半数以上存在局灶性粘膜白斑样增生。未出现赘生物 两反流组食管较前显著增粗，壁较前显著增厚，病变范围逐渐向上扩大，部分大鼠食管下段出现赘生物 24周各组大鼠肉眼可见病变率分别为：对照组0％，铁剂组53.8％，反流组94.7％，反流铁剂组100％。对照组及铁剂组与两反流组比有显著差别（P0.05），两反流组间差异无显著性。 3、食管粘膜光镜下形态变化 对照组大鼠食管下段组织结构正常 1）8周时 铁剂组食管粘膜上皮增生，分布不均 两反流组食管粘膜出现以下改变：①溃疡；②上皮过度增生，部分角化。③化生：鳞状上皮内出现柱状上皮化生，大部分为肠腺化生。上述改变以反流铁剂组病变程度重 2）24周时 铁剂组食管粘膜仍主要表现为上皮增生，程度加重，无异型增生及肿瘤发生。 反流组与反流铁剂组食管粘膜上皮多为重度增生，角化过度，腺上皮化生更多见，某些部位可发现上皮异型增生及食管腺癌。 讨 论 大鼠行食管十二指肠吻合术，造成胃十二指肠食管混合反流，可诱发明显的食管粘膜损伤（反流性食管炎） 过量的铁剂能促使食管粘膜发生增生改变 在致食管反流的基础上注射过量铁剂能制作BE及EA动物模型，安全、有效、成功率高 可能机制： 铁超载有利于DNA的合成和细胞增殖 过量铁剂可能造成组织氧化性损伤 铁超载破坏机体对恶性细胞的免疫监视 铁超载使抗氧化活性的微量元素耗竭 外国初步研究表明，铁剂可加重反流导致的食管损伤 因此铁剂可能对EA的形成是一增强因子，特别在反流导致粘膜损伤的基础上。 结 论 在致食管反流的基础上，腹腔注射过量铁剂可以导致大鼠BE和EA，该模型安全、成功率高、合理，是进行食管腺癌研究中较为理想的动物模型。 谢 谢 * * 正常大鼠食管胃十二指肠 食管 十二指肠 胃 食管 十二指肠 胃 胃 大鼠食管十二指肠吻合术后 食管大体形态 对照组食管粘膜 铁剂组食管粘膜 食管大体形态 反流组 反流铁剂组 反流铁剂组 对照组 铁剂组 反流组 反流铁剂组 分 组 0* 0* 2.6% 20.0%# 0# * 0# * 37.9% 31.4% 0# ** 0# ** 28.9%* 57.1%# 10 39 38 20 EA（%） 异型增生(%) BE（%） 终末只数 与反流组比＃P0.05；与反流铁剂组比*P0.05 ,**P0.01 各组Barrett食管及食管腺癌发生情况 正常食管粘膜 食管溃疡、炎症 食管上皮重度增生 腺上皮化生（BE） 腺上皮异型增生 食管腺癌