西北农林科技大学夏效东修改.pptVIP

本研究以鞣花单宁的微生物代谢产物尿石素A为研究对象，利用基因、蛋白质检测技术研究其对人动脉内皮细胞功能的影响，从细胞水平阐明尿石素A防治动脉粥样硬化的机制。研究结果为阐明尿石素A防治动脉粥样硬化的机制提供可靠的依据，为寻找长期、有效、安全的预防和治疗心血管疾病发生发展提供了新的膳食措施，为石榴等富含鞣花单宁的水果的开发利用提供了重要基础资料。 * * BCECF?AM，即2‘,7’-bis-(2-carboxyethyl)-5-(and-6)-carboxyfluorescein,acetoxymethyl?ester，是最常用的检测细胞内pH的荧光探针。????本BCECF AM(pH荧光探针)是配制于无水DMSO(anhydrous DMSO)中的储存液，浓度为5mM。????BCECF AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。BCECF AM没有荧光，进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成BCECF，从而被滞留在细胞内。BCECF在适当的pH值情况下可以被激发形成绿色荧光。最大激发波长和发射波长因pH的不同而有所不同，最大激发波长大致在503nm左右，最大发射波长大致在520nm左右，实际检测时推荐使用的激发波长为488nm，发射波长为535nm。常用的检测细胞粘附的荧光探针。 * 汇报人：夏效东 西北农林科技大学 教授 2016.8.17 尿石素A对ox-LDL诱导的 内皮细胞功能紊乱的影响及机制 3 2 1 4 目录Contents 研究内容 研究背景 研究结论 研究结果 1 2 4 3 5 瘫痪 中风 死亡 据统计： 我国每5个成人中有1人患有心血管疾病 动脉粥样硬化是诱发心血管疾病的主要病理基础 1.1 动脉粥样硬化发病率高 一、研究背景 1 动脉粥样硬化研究概况 巨噬-泡沫细胞形成-关键环节 在胞内胆固醇合成过多或者摄入过多的情况下，促进巨噬细胞胆固醇外流对抑制泡沫细胞形成和防治动脉粥样硬化起到关键作用。 内皮细胞功能紊乱—启动环节 动脉硬化发展的重要表征。体现出促炎、促血小板聚集、促血管收缩、促凝等机能转变。 microRNA—新型药物靶点 进行转录后基因调控。参与动脉粥样硬化进程的种类繁多，主要调节炎症反应、脂质代谢、细胞增殖等。 1.2 动脉粥样硬化分子机制 1 动脉粥样硬化研究概况 一、研究背景 尿石素A(Urolithin A, Uro-A) 是石榴、草莓、花生等富含鞣花单宁的食物经肠道微生物代谢生成的。 尿石素A在血浆中的浓度可达14~25 μM。 图1-2. 尿石素在肠道中的代谢过程 2.1 尿石素的形成 2 尿石素A研究概况 一、研究背景 抗癌活性 抗氧化活性 抗炎活性 抗疟疾活性 抗菌活性 2.2 尿石素生物活性 一、研究背景 2 尿石素A研究概况 在人动脉内皮细胞、THP-1源性巨噬细胞、LPS诱导的RAW264.7中，尿石素A可以显著抑制促炎因子表达上调，表现出强于其他种类尿石素的抗炎作用(Gimenez-Bastida et al. 2012，Piwowarski et al. 2014)。 尿石素A能够显著减弱人肝细胞和脂肪细胞中甘油三酯的累积并有效抑制THP-1/巨噬细胞中胆固醇的募集(Mele L et al. 2016, Kang I et al. 2016)。 因此推测尿石素A在小鼠RAW264.7巨噬细胞中具有潜在的抑制胆固醇摄入和合成的作用。 2.3 尿石素A研究进展 一、研究背景 2 尿石素A研究概况 第二部分 研究内容 人动脉内皮细胞 尿石素A 细胞活性 NO释放 单核-内皮黏附和黏附因子表达分析 炎症因子表达分析 炎症信号转导途径分析 细胞结构（LDH） 相关基因表达分析 从细胞水平阐明尿石素A防治动脉粥样硬化的机制 二、研究内容 二、研究内容 内皮细胞炎症反应 单核-内皮细胞粘附 尿石素A对动脉内皮细胞功能的影响 MTT毒性 乳酸脱氢酶含量及一氧化氮含量及表达分析 单核-内皮黏附和黏附因子表达分析 炎症因子表达分析 炎症信号转导途径分析 分子机制 尿石素A抗动脉粥样硬化形成的作用机制 研究技术路线 第三部分 研究结果 图1-1. Uro-A对HAEC细胞存活率的影响 内皮细胞存活率 工作浓度： 0.5 2.5 5 μΜ 孵育时间： 24 h 1.1 低浓度尿石素A促进内皮细胞存活率 1 尿石素A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核-内皮细胞粘附的影响 三、研究结果 1 尿石素A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核-内皮细胞粘附的影响 三、研究结果 1.3 尿石素A提高一氧化氮（NO）含量 图1-3. Uro-A对NO含量的影响 一氧化氮含量 1.2 尿石素A抑制乳酸脱氢酶（LDH）漏出率 图1-2. Uro-A对LDH漏出率的影响 乳酸脱氢酶