2 样品前处理技术1.ppt

（3）、卤化衍生化方法 引入卤原子→ECD检测器→也改善挥发性和稳定性。 卤素的作用是加成或取代 液相色谱的衍生化 1. 紫外衍生化反应 2． 荧光衍生化反应 3． 电化学衍生化反应 （1）紫外衍生化反应 苯甲酰氯 + 胺、醇、酚→苯甲酸酯类衍生物（２００～３６０ｎｍ ） 苯甲酰化反应 （2）荧光衍生化反应 在目标化合物上接上能发出荧光的生色基团，如荧光素。 生物大分子的细胞破碎与蛋白质的去除 生物样品 植物：营养成分、农药残留等 动物：体内的药物及代谢产物、 糖类、维生素、氨基酸等 微生物： 待测物的位置 体液或细胞外：采用萃取方法。也可将干扰组分（如蛋白质、DNA、多糖等等）沉淀除去。 生物细胞内：首先将细胞破碎，再采用萃取或沉淀等方法。 细胞的破碎 目的：就是为了破坏细胞的外壳，使细胞内含物有效地释放出来，获得有效的提取。 1）细胞的破碎方法 ① 组织较柔软：匀浆器研磨 ② 组织较韧：铰碎→匀浆 ③ 纤维组织：捣碎器破碎或加砂研磨。 ④ 微生物坚韧的细胞壁：用自溶、冷热交 替、加砂研磨、超声波和加压处理。 1、细胞的破碎方法 2）机械法（机械切力） ① 高速组织捣碎机： 20000r／min。 对象：动植物组织 ② 匀浆器：铰碎组织。对生物大分 子破坏较少。 ③ 研磨 ：玻璃砂。 3）物理法（物理作用） ① 反复冻融法： -15～-20℃。 ② 冷热交替法： 90℃维持数分钟，立即置于冰浴中冷却。 ③ 超声波处理法：用于微生物。 ④ 加压破碎法： 加气压或水压，可使90％以上细胞被压碎。 4）化学及生物化学法（化学试剂或酶） ① 自溶法： 在一定条件（pH、温度）下， 利用自身的酶系将细胞破坏。 ② 溶菌酶处理： 具有专一地破坏细菌细胞壁的功能。 Antifungal activity 例：溶菌酶处理 蛋白质的去除 目的：蛋白质的存在，常常严重干扰分析 1、加热法 2、盐析法 3、膜分离法 4、高速离心 5、有机溶剂沉淀法 1） 加热法 欲测组分热稳定性好时采用。加热到90℃。 蛋白沉淀后可用离心或过滤除去，能除去热变性蛋白。 2）盐析法 原理：利用不同蛋白质在高浓度的盐溶液中溶解度不同程度的降低来沉淀除去蛋白质。 在低盐浓度下，蛋白质溶解度随着盐浓度升高而增加，称为盐溶作用。 当盐浓度不断升高时，不同蛋白质的溶解度又以不同程度下降，并先后析出沉淀，称为盐析作用。 3）膜分离法 超滤：靠薄膜两侧压力差作为推动力来分离不同分子量的物质。 将欲测小分子化合物和大分子蛋白质分离。 4）高速离心 物质沉降系数、质量、浮力因子等不同， 用离心力使物质分离、浓缩、提纯的方法。 小 中 大 * * * * 超临界萃取剂的临界温度越接近操作温度，则溶解度越大。临界温度相同的萃取剂，与被萃取溶质化学性质越相似，溶解能力越大。应该选取与被萃取溶质相近的超临界流体作为萃取剂。 2.3 超临界流体的选择性 用作萃取剂的超临界流体应具备以下条件: 化学性质稳定，对设备没有腐蚀性，不与萃取物反应； 临界温度应接近常温或操作温度，不宜太高或太低； 操作温度应低于被萃取溶质的分解变质温度； 临界压力低，以节省动力费用； 对被萃取物的选择性高（容易得到纯产品）； 纯度高，溶解性能好，以减少溶剂循还用量； 货源充足，价格便宜，如果用于食品和医药工业，还应考虑选择无毒的气体。 2.4 超临界流体的选择原则 改性剂 实用意义 混合流动相 改性剂 分别混合: 2台泵 缺点: a. 不能做梯度洗脱 b. 彻底清洗容器 预混合: 改性剂的添加方式 胡萝卜在不同丙酮含量下胡萝卜素在CO2中的溶解度和提取率。 序号 丙酮含量（%）(mol） 胡萝卜素溶解度(mg/L3) 提取率(%) 1 0 0.0842 27 2 12 0.2349 63.2 3 22.6 0.398 88.23 4 30 0.6575 97.8 1. CO2超临界萃取具有广泛的适应性，特别对于天然物料 的萃取，其产品称得上是100%纯天然产品。 2. 可在较低温度下操作，特别适合于热敏性物质，完整保留生物活性，而且能把高沸点，低挥发度，易热解的物质分离出来。 3. 溶剂没有污染，可以回收使用，简单方便，节省能源。 4. 须在高压下操作，设备与工艺要求高，一次性投资比较大。 2.5 超临界CO2萃取的特点 超临界流体萃取装置组成 （1）超临界流体发生源，由萃取剂储瓶、高压泵及其他附属装置组成，其功能是将萃取剂由常温压态转化为超临界流体。 （2）超临界流体萃取部