实验三细菌的简单染色和革兰氏染色.ppt

实验三 细菌的简单染色和革兰氏染色 一 细菌的简单染色 （一）目的要求 （二）基本原理 （三）实验材料 （四）无菌操作过程 （五）简单染色操作步骤 （一）目的要求 学习制染色片技术，学习简单染色的原理。 2 学习并掌握无菌操作的技术。 3 掌握简单染色方法、。 4 巩固显微镜油镜的使用方法。 （二） 基本原理 细菌细胞微小，且含水量较多，在普通光镜下表现为无 色透明，不易观察，所以必须进行染色处理，使细胞着 色，便于观察。 简单染色是使用单一染料染色，可用于观察细菌形态、 大小、及排列方式。 染色前一般要将细胞固定，其目的是杀死菌体并使之粘 附于玻片上，还可以增强菌体的着色能力。固定有加热 法和化学法两种，无论采用何种方法均应维持细胞原有 形态。 （三） 实验材料 大肠杆菌（24 h 培养）斜面菌种 枯草杆菌（12h 培养）斜面菌种 （四）无菌操作过程 无菌操作：不让除我们接种的微生物以外 其它微生物侵入，同时也不污染 环境的技术。 （五） 简单染色操作步骤 1　 涂片： 载玻片、无菌水、斜面菌种、无菌操作、均匀的薄层 2　 干燥： 3　 固定：加热固定 4　 染色： 结晶紫染1min，或石炭酸复红染1min。 5　 水洗： 6 干燥： 7　 镜检： 低倍镜观察以确定目标和范围，再换用油镜观察绘图。 二 细菌的革兰氏染色 （一）目的要求 （二）基本原理 （三）实验材料 （四）操作步骤 （一） 目的要求 1 学习革兰氏染色原理，理解着色机理。 2 掌握革兰氏染色的方法，并能正确染色。 3 学习并掌握无菌操作技术 4 巩固显微镜油镜的使用方法 （二） 基本原理 革兰氏染色是用于细菌鉴别的一种重要染色方法。它是根据革兰氏阳性细菌、阴性细菌细胞壁结构、组成的不同而使用一系列的染色处理使之差别显色。其染色方法是先将细菌分别用结晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脱色，再经复染剂复染。最终被染成红色的是革兰氏阴性细菌；被染成紫色的是革兰氏阳性细菌。 1 2 3 4 ？ 革兰氏染色原理： 第一步：结晶紫使菌体着上紫色 第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁 阻留在细胞内。 第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。 G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色 时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物 被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。 G- 菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收 缩，因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结 晶紫-碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细 胞无色，蕃红复染后呈红色。 （三）实验材料 大肠杆菌（24h培养）斜面菌种 枯草杆菌（12h培养）斜面菌种 （四）操作步骤 1　涂片：方法同单染色，然后干燥、固定。 2　初染：滴加结晶紫染色1min，后用水冲洗。 3　媒染：滴加碘液染色1-2min，后用水冲洗，甩尽残余水 4　脱色：用95%乙醇冲洗30秒（需要严格控制时间和浓度）， 然后立即用水冲洗。 5　复染：用石炭酸复红覆盖涂片进行复染，石炭酸复红 染1min。水洗，晾干。 6　镜检：先用低倍镜观察，后用油镜观察。 阳性菌 阴性菌 1 2 3 4 三 实验报告 1 写出简单染色、革兰氏染色的实验目的。 2 写出简单染色、革兰氏染色的基本原理。 3 根据实验结果绘出简单染色和革兰氏染色的结果图。 菌名： 放大倍数： 细菌简单染色结果图 细菌革兰氏染色结果图 要求： 标出菌名、颜色、阳性或阴性菌 放大倍数： 四 思考题 1 如果对一未知菌进行革兰氏染色，如何能确证染色 结果正确可靠？ 2 为什么说95%酒精脱色是革兰氏染色的关键步骤？